1. 溶液准备： RIPA缓冲液：50mM Tris-HCl pH7.4 ，150mM NaCl ，1mM EDTA，1%Triton100，1%去氧胆酸钠，0.1%SDS，1mM PMSF，1g/ml 牛胰蛋白酶抑制剂 （ aprotinin ） ， 1g/ml亮抑蛋白酶肽 （ leupeptin ） PBS （ pH7.4 ） ：10mM Na2HPO4，1.8mM KH2PO4 ，...

1. 溶液准备： PBS （ pH7.4 ） :10mM Na2HPO4 ，1.8mM KH2PO4 ， 50mM NaCl ， 2.7mM KCl 封闭缓冲液：3%BSA-PBS 2. 程序： 1 ） 对石蜡切片进行脱蜡和水化：310min 二甲苯，5min 100%乙醇，5min 95%乙醇，5min 80%乙醇， 5min 70%乙醇，35min PBS。 2 ） 修...

（一）基本原理 Sano等（1992）率先利用基因工程的方法表达了A蛋白与链霉亲和素的嵌合体分子获得成功，建立了免疫PCR技术。这是一种新的抗原检测系统，利用细胞工程和基因工程技术，巧妙地将抗原抗体反应的特异性同PCR的敏感性相结合，通过构建单克隆抗体与重...

滚动式循环放大（RCA）法是一种能够在恒温条件下，使标记有寡核苷酸探针（与组织细胞内的核苷酸无相关性）的抗体（特异性一抗或第二抗）与组织细胞内的抗原结合后，在DNA聚合酶的作用下，加入的寡核苷酸进行循环扩增，产生一条扩增的DNA序列拷贝产物，此时，...

一、原理 本法是由Geoghegan等（1978）首次应用金标探针检测B淋巴细胞表面抗原，将胶体金颗粒（大于20nm）标记在第二抗体或SPA分子上，制备成金标二抗。其原理是当特异性抗体与抗原结合后，用金标二抗或金标SPA与特异性抗体结合，形成抗原-抗体-金标抗体复合...

一、柠檬酸钠法 1. 把玻片放在玻璃固定架上，再将架子放在盛有600ml的10mM柠檬酸钠（pH6.0）的容器中。 2. 微波中高火6-8min。 3. 室温冷却。 4. 用PBS洗涤3次，每次5min。 二、蛋白酶K法 1. 配制新鲜溶液： 25l 20mg/ml蛋白酶K； 2.5ml 1MTris-HCl（pH8.0）...

一、非特异性染色的识别 常出现在组织边缘、胶原纤维及血浆渗出处，坏死组织及固定不良的组织中心处。表现为弥漫性，均匀性的背景染色。也可以是随机分布的阳性反应产物点、团或块状。 二、非特异性染色的原因 1. Ig与Fc受体结合 多见于冰冻切片（特别是淋巴...

（一） 原理 免疫电镜技术是免疫化学技术与电镜技术结合的产物，是在超微结构水平研究和观察抗原、抗体结合定位的一种方法学。它主要分为两大类：一类是免疫凝集电镜技术，即采用抗原抗体凝集反应后，再经负染色直接在电镜下观察；另一类则是免疫电镜定位技术...

标记好的免疫金探针必须经过纯化处理才能用于IHC染色，尤其是免疫电镜的染色。纯化的目的就是除去其中未标记的蛋白质，未充分标记的胶体金及在标记过程可能形成的各种聚合物。其纯化方法有超速离心法、色谱柱法以及以上二者相结合应用。 （一）超迷离心法 根...

当蛋白质的最适稳定量及标记的最佳pH值被确定以后，便可进行标记。具体步骤如下。 （1）根据标记所用胶体金的总量计算出所需要待标记蛋白质的总量。 （2）边搅拌边将蛋白质溶液加入胶体金溶液中，逐渐加入，lmg的蛋白质量大约需5min,或在搅拌下将胶体金逐渐加...