星形胶质细胞来源于2天的大鼠。断头后的大鼠大脑收集在含有11mM 碳酸氢钠，71mM葡萄糖和1%抗菌素的DMEM溶液中。移除脑膜，血管和白质。大脑皮层用机械分裂法进行匀浆，然后将细胞悬液经230m，104m 和73.3m孔的铁丝网依次过滤。然后用700g 速度10分钟离心收集...

混合胶质细胞培养来源于1-2天的大鼠，如同星形胶质细胞培养，有轻微的改动。乳鼠断头后大脑收集在DMEM-Hams F-12含有1%抗菌素的溶液中。除去脑膜，血管和白质后，用机械匀浆法将大脑皮层匀浆，然后将细胞悬液依次通过230m和104m孔径的钢网过滤，然后用离心法...

化学名：2-[4-（2-Hydroxyethyl）-1-piperazinyl] ethanesulfonic acid 中文名：羟乙基哌嗪乙硫磺酸 分子式：C8H18N2O4S 分子量：238.3 HEPES是一种非离子两性缓冲液，其在pH 7.2 - 7.4 范围内具有较好的缓冲能力。其最大优点是在开放式培养或细胞观察时能维...

一、取材的基本要求 （1）取材要注意新鲜和保鲜 新鲜组织易于培养成功，取材时应尽量在4~6h内能制作成细胞，尽快入箱培养，若不能即时培养，应将组织浸泡于培养液内，于4℃存放。若组织块较大，应在清除表面血块、坏死组织、脂肪和结缔组织后，切碎于培养液内...

一、传代细胞的传代培养 （1）吸除或倒掉原瓶中的旧培养基（以25mL培养瓶为例）。 （2）每瓶加入2mL,无钙、镁PBS，漂洗一次后倒掉。 （3）每瓶加入1mL消化液（0.25%胰蛋白酶或0.02%EDTA或混合液），轻轻摇动培养瓶，经消化液铺满所有细胞表面，待细胞层略有松...

一、原代细胞的培养与维持 1、静置贴壁细胞（包括半贴壁细胞的培养） 凡经消化液处理实体组织来源的细胞要通过充分漂洗，以尽量除去消化液的毒性，细胞接种时浓度要稍大一些，至少为5108细胞/L,培养基可用 Eagle（MEM）或DNEM培养，小牛血清浓度为10%~80%。在...

三、原代细胞的培养方法 原代细胞的培养也叫初代培养 是从供体取得组织细胞在体外进行的首次培养，是建立细胞系的第一步，是一项基本技术。原代细胞因刚从组织中分离开，生物学特性未发生很大变化，仍保留原来的遗传特性，也最接近和反映体内生长特性，适宜用...

（2） 胶原酶（Collagenase）消化法 胶原酶是一种从细菌中提取出来的酶，对胶原有很强的消化作用。适于消化纤维性组织、上皮组织以及癌组织，它对细胞间质有较好的消化作用，对细胞本身影响不大，可使细胞与胶原成分脱离而不受伤害。该酶分离效果好，即使有...

（二）消化分离法 组织消化法是把组织剪切成较小团块（或糊状），应用酶的生化作用和非酶的化学作用进一步使细胞间的桥连结构松动，使团块膨松，由块状变成絮状，此时再采用机械法，用吸管吹打分散或电磁搅拌或在摇珠瓶中振荡，使细胞团块得以较充分的分散，...

（四）骨髓、羊水、胸/腹水细胞取材 取上述标本时，除严格无菌，注意抗凝外，还要尽快分离培养，一般无需其他处理，离心后，用无钙、镁PBS洗两次，再用培养液洗一次后即可培养，不宜低温存放。具体操作详见后面有关章节。 （五）动物组织取材 1、鼠胚组织取材...