原代细胞培养：取5kg左右兔空气栓塞法处死后断头，于无菌条件下从枕大孔处用大止血箝扳开颅骨暴露并小心取出脑组织放入装有DMEM的培养皿中，用眼科镊分离基底动脉后按常规平滑肌方法贴块培养。 传代： （1）吸除培养瓶内旧培养液。 （2）D-Hanks液冲洗2遍。...
刚开始养SK-BR-3时，细胞状态不是很好，贴壁也不均匀，于是开始想办法，考虑是不是吹打的不够，或是传得过多，或是其它的什么，后来发现的确如此，细胞的生长状态与传代的方法有很密切的联系。 我的传代方法是： 以50平方厘米培养瓶为例，待细胞长满瓶底70％...
一、取得完全无血液残留的肺脏： 实验前j将大鼠全身血液放净，取得完全无血液残留的肺脏 二、消化肺组织： 常用于细胞消化的酶有胰蛋白酶、弹性蛋白酶、胶原酶。胰蛋白酶是最早用于消化、分离上皮细胞的酶，现在一般用损伤性小的弹性蛋白酶来替代胰蛋白酶。但...
实验步骤 采血： 需要在严格无菌条件下采血。肝素抗凝，室温保存，24hr-72hr转化效率高。也有保存更长时间，采血后不要将血液置冰箱中，长途运输也不要冷藏。 分离淋巴细胞： 采集血液4-5mL，与2mL1640（含1%双抗）在离心管内混合，然后缓慢沿管壁注入淋巴分...
准备的药品：pbs,199培养液，I型胶原酶（SIGMA）。 主要的器械：手术剪，镊子，止血钳，丝线，鞘管（PTCA用的动脉鞘的扩张管，6F或7F）。 首先，以PBS漂洗脐带1-2次，用剪刀将脐带剪成数段15CM左右长短（本人认为这个长度较为合适）。 之后，以止血钳提起一段...
1、将切下的组织在手术台上请护士将标本放入低温生理盐水中（可不要动它），在手术完成时将标本放入PBS冰水液中并放入消毒的容器中带回实验室； 2、在超净台中将标本放入培养皿中，加入-MEM洗涤； 3、获得组织切开，仔细辨认于关节反折处及增生的白色光滑的滑...
1、将静脉血20ｍl用ACD抗凝剂以容积比血：抗凝剂＝9：1抗凝处理 2、按血：分离液＝1：2注入国产淋巴细胞分离液上层，400g 20℃离心30分钟 3、交接层重浮于4倍体积的RPMI1640并通过离心法200g，10min洗三次 4、获得细胞可做分选或其他实验。 体会： 1、实验中...
1.材料和方法 1.1 DMEM/F12条件培养液（亚硒酸钠40gL-1，腐胺16.2 mgL-1，转铁蛋白100 mgL-1，胰岛素234UL-1，甲状腺素0.4gL-1，黄体酮0.62 mgL-1，谷氨酰胺3gL-1）。DMEM/F12培养基、小牛血清购自Hyclone公司，兔抗鼠GC抗体、亚硒酸钠、腐胺等购自Sigma公司...
溶液以及器材： 1、用RPMI-1640配I型胶原酶 0.1g/100ml 2、配三抗： 青霉素：100ku/L 链霉素：100ku/L 庆大霉素：100ku/L 3、培养液（M199＋ECGS[3ug/ml]＋15％胎牛血清）有EGF可以适当加点10ng/ml 4、大瓶生理盐水 5、广口瓶（脐带数＋1） 6、止血钳（脐带数...
1、293细胞明显适应酸性环境,pH值在6.9～7.1时,可顺利贴壁生长, 换液时动作要轻。一般用高糖的DMEM培养基。 2、传代：倒去废液，PBS洗一次（轻），用0.02%EDTA与0.25%Trypsin消化，生长良好细胞，培养瓶中轻摇,使之流遍所有细胞表面,即将其吸除或弃去消化30s...