苏木精-伊红(HE)染色 染液制备: 1. 苏木精染液 (1) 称取0.5g苏木精、5.0g铵矾或钾矾和0.1g碘酸钠加温溶于70ml蒸馏水中; (2) 加入30ml甘油和2ml冰乙酸充分混匀后过滤即成母液; (3) 母液可长期保存。用蒸馏水以1:20稀释母液即成工作液。工作液也较...
原代细胞甲基绿-哌咯宁法显示DNA和RNA 基本原理: 甲基绿(methyl green)和哌咯宁(pyronin)均为碱性染料,因此可与带负电荷的磷酸根形成盐。甲基绿分子有2个正电荷,易与双链DNA分子结合使原代细胞核内的DNA呈蓝绿色。哌咯宁分子有一个正电荷,易与单链RNA...
原代细胞DNA与RNA的吖啶橙荧光染色法 基本原理: 吖啶橙(acridine orange,AO)是一种常用荧光染料,吖啶橙与原代细胞内的DNA、RNA都有亲和力,但有一定的特异性,即结合后发不同颜色的荧光,DNA呈亮绿色,而RNA呈橘红色至火红色。此法简便快捷,既可染活原...
原代细胞富尔根(Feulgen)反应显示DNA 基本原理: 显示DNA的传统方法是富尔根(Feulgen)反应,切片先用稀盐酸处理,DNA经弱酸(1mol/L HCL)水解后,在60℃条件下使DNA分子中脱氧核糖与嘌呤之间的连接打开,脱氧核糖的一端释放出醛基,并在原位与Schiff试剂...
四乙基罗丹明标记抗体﹠四甲基异硫氰酸罗丹明标记抗体 四乙基罗丹明标记抗体: 1.称取1g RB200及2g PCL5放在乳钵中于通风橱中研磨5min; 2.加入10ml无水丙酮,不断搅拌,5min后过滤,用滤液进行标记抗体。剩 余部分吸附在滤纸上,于4℃干燥保存; 3.量取一定...
FITC标记抗体-改良法 试剂: 1.0.01mol/L pH7.2 配方。将NaCl 18g、Na2HPO4 1.15g、KH2PO4 0.2g, 溶于2000ml三蒸水中,调整pH至7.2; 2.0.5mol/L pH9.0碳酸盐缓冲液配法。量取0.5mol/L Na2CO3(5.3%)10ml 加入0.5mol/L NaHCO3(4.2%)90ml中,充分混合后,...
FITC标记抗体-Marhall氏法 材料: 抗体球蛋白溶液、0.5mol/L pH9.0碳酸盐缓冲液、无菌生理盐水、异硫氰酸荧光素、1%硫柳汞水溶液、三角烧瓶(2550ml)、冰及冰槽(或1000ml烧杯)、电磁搅拌器、灭菌吸管、透析袋、玻璃棒、棉线及烧杯(500ml)、pH7.2或8.0的0...
FITC标记抗体-Chadwick氏法 试剂: 抗体球蛋白溶液、异硫氰酸荧光素、3%重碳酸钠水溶液、pH8.0的0.01mol/L 、1%硫柳汞; 材料: 离心机及离心管、三角烧瓶(25ml)、冰槽、无菌吸管及毛细滴管、透析袋、玻璃棒、棉线及烧杯(500ml)等; 方法与步骤: 1. 抗体...
正常小鼠腹股沟脂肪垫获取脂肪源干细胞 实验材料: 1.Hankrsquo缓冲盐溶液(H); 2.ASC培养基:含10%胎牛血清的DMEM,添加1%的P/S; 3.胶原酶溶液:100ml Hankrsquo缓冲盐溶液中加入1g牛血清白蛋白和0.1gⅡ型胶原酶; 4.聚乙烯吡咯酮碘溶液; 5.陪替氏培养皿...
正常人羊膜细胞(HAM)原代细胞培养 实验材料: 1.人胎盘; 2.A/GA:含抗生素的A(庆大霉素,50g/ml;两性霉素B,1.25g/ml;链霉素100g/ml;青霉素100U/ml); 3.丙三醇; 4.含50%丙三醇的DMEM; 5.胰蛋白酶/EDTA; 6.Millicell微孔膜组织培养插片; 7.塑料刮...