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二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(two-dimensional polyacrylamide gel el2017-10-15 21:25:42
二维聚丙烯酰胺凝胶电泳技术结合了等电聚焦技术（根据蛋白质等电点进行分离）以及SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳技术（根据蛋白质的大小进行分离）。这两项技术结合形成的二维电泳是分离分析蛋白质最有效的一种电泳手段。通常第一维电泳是等电聚焦，在细管中（1～3...
电泳技术(electrophoretic techniques)简介-52017-10-15 21:24:54
三、琼脂糖凝胶电泳法 1.仪器装置电泳室及直流电源同纸电泳。 2.试剂 (1)醋酸－锂盐缓冲液(pH3.0)取冰醋酸50ml，加水800ml混合后，用氢氧化锂调节pH至3.0，再加水至1000ml。 (2)甲苯胺蓝溶液取甲苯胺蓝0.1g，加水100ml使溶解。 3.操作法 (1)制胶取琼脂糖约0.2...
电泳技术(electrophoretic techniques)简介-42017-10-15 21:24:09
各电泳法，除另有规定外，照下述方法操作。一、纸电泳法 1.仪器装置包括电泳室及直流电源两部分。常用的水平式电泳室装置如图，包括两个电泳槽A和一个可以密封的玻璃(或相应材料)盖B；两侧的电泳槽均用有机玻璃（或相应材料）板C分成两部分；外格装有铂电极(...
电泳技术(electrophoretic techniques)简介-32017-10-15 21:23:18
（三）等电聚焦电泳技术等电聚焦（isoelectric focusing，IEF）是60年代中期问世的一种利用有pH梯度的介质分离等电点不同的蛋白质的电泳技术。由于其分辨率可达0.01pH单位，因此特别适合于分离分子量相近而等电点不同的蛋白质组分。 ⒈IEF的基本原理在IEF的...
电泳技术(electrophoretic techniques)简介-22017-10-15 21:22:32
⒈材料与试剂醋酸纤维素膜一般使用市售商品，常用的电泳缓冲液为pH8.6的巴比妥缓冲液，浓度在0.05-0.09mol/L。 ⒉操作要点 ⑴膜的预处理：必须于电泳前将膜片浸泡于缓冲液，浸透后，取出膜片并用滤纸吸去多余的缓冲液，不可吸得过干。 ⑵加样：样品用量依样...
电泳技术(electrophoretic techniques)简介-12017-10-15 21:21:45
电泳法，是指带电荷的供试品（蛋白质、核苷酸等）在惰性支持介质（如纸、醋酸纤维素、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等）中，于电场的作用下，向其对应的电极方向按各自的速度进行泳动，使组分分离成狭窄的区带，用适宜的检测方法记录其电泳区带图谱或计算其百分...
Native-PAGE(非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳)原理、方法步骤与常见问2017-10-15 21:20:59
问题和解答 1. 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳时预电泳是怎么回事的？预电泳时要加6DNA上样缓冲液吗？电泳1－2小时再加结合反应产物吗？预电泳是除去凝胶中没有聚合的单体和双体和聚合引发剂，提高分辨率，不加任何物质，一般３０－６０分钟后加样电泳。 2. 银染...
Native-PAGE(非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳)原理、方法步骤与常见问2017-10-15 21:20:12
电泳条件:100V恒压约20min，指示剂进入浓缩胶；改换160V恒压，当指示剂移动到胶板底部时，停止电泳，整个过程约80min。染色和脱色:取出胶板于0.25％考马斯亮蓝染色液中染色约30min，倾出染色液，加入考马斯亮蓝脱色液，缓慢摇动，注意更换脱色液，直至胶板干...
Native-PAGE(非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳)原理、方法步骤与常见问2017-10-15 21:19:26
Native-PAGE原理非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)是在不加入 SDS 疏基乙醇等变性剂的条件下，对保持活性的蛋白质进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，常用于同工酶的鉴定和提纯。未加SDS的天然聚丙烯酰胺凝胶电泳可以使生物大分子在电泳过程中保持其天然的形状和...
Native-PAGE(非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳)的分类-22017-10-15 21:18:41
1.3.3 实验方法（1）储备液 1）200mM Tris-HCl 10mM NaN3 PH10.00，室温 2）200mM Tris-HCl 10mM NaN3 PH8.00，室温 3）40%丙烯酰胺/双丙烯酰胺2.67C，4℃（新鲜）（2）电泳缓冲液 20mM Tris-HCl 1mMNaN3 PH10.00（除气），4℃ 电泳槽上部：500ml电泳缓冲液...