2.3.2 第二向SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） 选用DYY-Ⅲ型（北京六一仪器厂生产）电泳槽（规格为2002001mm），分离胶浓度为12%，无浓缩胶。待胶聚合后，将电聚焦后已经平衡的胶条平放于浓缩胶顶端（避免胶条拉直），并用1%琼脂糖（电极缓冲液配制）封胶...
双向电泳IEF （sigma）IEF（not IPG）/SDS-PAGE最简单的装备推荐如下，适合于没多少money做IPG又想做热的所谓蛋白质组的，嘻嘻！ IEF用Biorad的圆盘电泳槽（不行用国产的吧，不推荐），SDS-PAGE用六一厂的就可以了（ft，六一厂应该给我money吧，给你做广告了...
1、蛋白质样品的特征： 复杂，含盐或其他污染物 易被蛋白酶降解 动态范围宽（X106） 溶解性不均一（疏水性/亲水性） 分子量、等电点的范围宽（10-500KDa，pH2-14） 2、样品分离的基本要求： 高灵敏度和分辨率 宽动态范围 小样品体积 高通量 合适的温度和pH 避...
样品制备（Sample preparation） 固相预制胶条的水化（IPG strip rehydration） 第一向等电聚焦（IEF） 胶条的平衡（IPG strip equilibration） 第二向SDS-PAGE 电泳（SDS-PAGE electrophresis） 凝胶的染色及检测（Detection/Staining） PDQuest 软件分析（S...
（一）第一向等电聚焦 1.从冰箱中取-20℃冷冻保存的水化上样缓冲液（I）（不含DTT，不含Bio-Lyte）一小管（1ml/管），置室温溶解。 2.在小管中加入0.01g DTT，Bio-Lyte 4-6、5-7各2.5ml，充分混匀。 3.从小管中取出400ml水化上样缓冲液，加入100ml样品，充分...
免疫电泳（immunoelectrophoresis ）是将电泳和琼脂扩散结合起来，用于分析抗原组成的一种定型方法，具有灵敏快速的优点。该实验可分为如下两个步骤： 1.电泳 将待检的可溶性物质在琼脂板上进行电泳分离。由于各种可溶性蛋白分子的大...
等电聚焦（isoelectric focusing，IEF）是60年代中期问世的一种利用有pH梯度的介质分离等电点不同的蛋白质的电泳技术。由于其分辨率可达0.01pH单位，因此特别适合于分离分子量相近而等电点不同的蛋白质组分。 ⒈IEF的基本原理 在IEF的电泳中，具有pH梯度的介...
等电点聚焦就是在电泳槽中放入载体两性电解质，当通以直流电时，两性电解质即形成一个由阳极到阴极逐步增加的pH梯度，当蛋白质放进此体系时，不同的蛋白质即移动到或聚焦于与其等电点相当的pH位置上，电聚焦的优点是：有很高的分辨率，可将等电点相差0.01-0.0...
凡能催化同一种化学反应，但其分子结构和带电性质不同的一组酶称同工酶（isoenzyme）。同工酶谱的差异是基因表达的差异造成的，所以在研究植物基因调控与生长发育及其与环境条件的关系以及许多生理生化和遗传问题时，常常要分析同工酶谱的差异。因此，同工酶...
1.缓冲系统：在没有离子存在时，电导率最小，DNA不迁移，或迁移极慢，在高离子强度的缓冲液中，电导很高并产热，可能导致DNA变性，因此应注意缓冲液的使用是否正确。长时间高压电泳时，常更新缓冲液或在两槽间进行缓冲液的循环是可取的。 2.琼脂糖：不同厂家...