1. 30%储备胶溶液： 丙烯酰胺（Acr） 29.0g 亚甲双丙烯酰胺（Bis） 1.0g 混匀后ddH2O，37℃溶解，定容至100ml，棕色瓶存于室温。 2. 4分离胶缓冲液（1mol/L Tris-HCl PH 8.8） Tris 18.17g加ddH2O溶解，浓盐酸调PH 8.8，定容至100ml。 3. 4浓缩胶缓冲液（0.5m...
免疫印迹（immunoblotting）又称蛋白质印迹（western blot），它是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。western blot是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术。由于免疫印迹（western blot）具有SDS-PAGE的...
一、 试剂配方： 1X TBS: Tris-base 12.11g Nacl 8.775g 用HCl 调pH7.4，用纯水稀释至1L 5X Transfer buffer: Tris-base 15.1g Glycine 72.0g To 1 L 10X碱性磷酸酶缓冲液： 1 mol/L Tris-HCl pH 9.5 1 mol/L Nacl 50mmol/L MgCl2 TTBS：1XTBS +TWEEN20（1000...
组织印迹的Western杂交 在硝酸纤维素膜上制备组织印迹 1．在塑料板上放置两层Whatman 1号滤纸，在滤纸上方放上一张普通纸，然后铺上一层硝酸纤维素膜。 2．用双面刀片从植物组织如大豆的茎上切取一块切片（厚度约为 1mm）。如果组织表面是湿的，则在Kimwipes...
第二部分：免疫印迹染色 [仪器、材料与试剂] (一)仪器与器具 1．电泳仪(要求为大电流低电压) 2．电泳转移槽及转移夹 3．水平摇床 4．小塑料盒 5．镊子 6．搪瓷盘 (二)材料 1．醋酸纤维膜 2．滤纸 3．一次性塑料手套 (三)试剂 1．转移电泳缓冲液 25mmo1／L Tri...
[实验原理] 免疫印迹（Western blotting 或 Immunoblotting）一般由凝胶电泳、样品的印迹和免疫学检测三个部分组成。第一步是做SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳，使待测样品中的蛋白质按分子量大小在凝胶中分成带。第二步把凝胶中已分成条带的蛋白质转移到一种固相支持...
试剂配制 （一）母液 1.0mol/L TrisHCl Tris (MW121.14) 30.29g 蒸馏水 200ml 溶解后，用浓盐酸调pH至所需点（见下所示），最后用蒸馏水定容至250ml，高温灭菌后室温下保存。 PH HCl 7.4 约17ml 7.5 约16m 7.6 约15ml 8.0 约10ml 1.74mg/ml (10mmol/L)PMSF PM...
Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。 实验原理 与Southern或 Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯...
（三） SDS－PAGE电泳 （1） 清洗玻璃板： 一只手扣紧玻璃板，另一只手蘸点洗衣粉轻轻擦洗。两面都擦洗过后用自来水冲，再用蒸馏水冲洗干净后立在筐里晾干。 （2） 灌胶与上样 1、玻璃板对齐后放入夹中卡紧。然后垂直卡在架子上准备灌胶。（操作时要使两玻璃...
10X丽春红染液 丽春红S 2g 三氯乙酸 30g 磺基水杨酸 30g 蒸馏水至 100ml 使用时将其稀释10倍。 TBS缓冲液（100mmol/ L Tris?HCl pH7.5,150mmol/L NaCl） 1 mol/ LTrisHCl（pH7.5） 10ml NaCl 8.8g 蒸馏水至 1000ml TBST缓冲液（含 0.05％Tween20的TBS缓冲液）...