多克隆抗体的制备 1. 器材: 剪刀(剪兔毛用)一把、弯头眼科手术镊子(游离血管用)一把、直头眼科手术剪(剪血管用)一把,手术刀架,手术刀片,注射器(1ml、10ml,25ml)附针头,兔子固定架,灭菌三角烧瓶(200ml)或平皿(直径 18cm)、弯头止血钳四把,直头...
⒊ 注射抗原 ⑴ 准备两只成年兔,将100g抗原/兔溶入1ml磷酸缓冲溶液中待用。在1ml福氏不完全佐剂中加入分枝杆菌制成完全佐剂,并加入1ml抗原溶液,剧烈震荡使之充分乳化,用3ml注射器抽取该乳化液,接上25G针头,排除注射器中的气泡。从笼中取出兔子放在平坦...
一、多克隆抗体的制备 【实验原理】 当将抗原注射入实验动物体内时,一系列抗体生成细胞会不同程度的与抗原结合,受抗原刺激后在血液中产生不同类型的抗体,这种由一种抗原刺激产生的抗体称为多克隆抗体。多克隆抗体中不同的抗体分子可以以不同的亲和能力与抗...
【实验原理】 免疫电泳又称为球蛋白电泳或免疫球蛋白电泳技术,这是一种能够判断血液中三种免疫球蛋白IgM, IgG, IgA含量水平的实验方法。在这项实验技术中,首先利用蛋白质的分子量和所带电荷的比值运用水平琼脂糖凝胶电泳技术将蛋白质进行分离,然后将特异性...
制备免疫血清的传统方法是将抗原注入动物体内,由动物体内 B 细胞增殖分化成浆细胞产生抗体。由于抗原分子(完全抗原)具有多种抗原决定簇,每一种抗原决定簇可以激活具有相应抗原受体的 B 细胞系产生该决定簇的抗体,因此用抗原免疫机体获得的免疫血清一般均...
一、原理 定量的抗原加入到含有一定量的相应抗体的琼脂糖凝胶中,在电场作用下,引起抗原抗体的迁移和相互反应,当比例合适时形成肉眼可见的沉淀峰,由于电泳继续进行,样品孔不断有抗原移向抗原抗体复合物的沉淀峰,因抗原过剩使沉淀溶解而在前面又形成新的...
1968年Miles和Hales建立了利用核素标记的抗体检测抗原的放射分析法,为了与放射免疫分析区别,故称免疫放射分析技术(immunoradiometric assay,IRMA)。由于它应用核素标记抗体作为示踪剂,在反应体系中加入过量的抗体,待测抗原(或标准品)与和核素标记抗...
获得稳定的杂交瘤细胞系后,即可根据需要大量生产单抗,以用于不同目的。 一、单抗的大规模制备 目前大量制备单抗的方法主要有两大系统,一是动物体内生产法,这是国内外实验室所广泛采用;另一是体外培养法。 1、动物体内生产单抗的方法 迄今为止,通常情况...
1、超速离心法 此法分离和纯化抗原的原理是利用各颗粒在梯度液中沉降速度的不同,使具有不同沉降速度的颗粒处于不同密度梯度层内,达到彼此分离的目的。常用的密度梯度介质有蔗糖、甘油、CsCl等。 用超速离心或梯度密度离心分离和纯化抗原时,除个别成分外,...
蛋白质、糖蛋白、脂蛋白、酶类、补体、脂多糖、细菌外毒素和核酸等均为可溶性抗原,它们有相当部分来源于组织和细胞,成分复杂。制备这类免疫原时,首先须将组织和细胞破碎,然后再从组织和细胞匀浆中提取目的蛋白或其他抗原,提纯的抗原需鉴定后才能用做免疫...