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  • 细胞增殖检测:MTT实验经验总结2017-10-12 20:34:04

    MTT分析法以活细胞代谢物还原剂3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide, MTT噻唑蓝为基...

  • 靶细胞杀伤实验:AnnexiV标记法2017-10-12 20:33:21

    正常细胞的磷酯酰丝氨(phosphatidylserine,PS)位于细胞膜内表面,细胞凋亡时翻转露于膜外侧,可与annexinV高亲合力结合。研究发现PS外翻为细胞凋亡的早期事件,先于膜通透性增加所51Cr或其他染料的释放。将效应细胞与靶细胞充分共育后,用PE结合的效应细胞...

  • 靶细胞杀伤实验:MTT和CCK8比较2017-10-12 20:32:39

    Cell Counting Kit-8简称CCK-8试剂盒,是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。 WST-8是一种类似于MTT的化合物,在电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan。细胞增殖越多越快,则颜...

  • 靶细胞杀伤实验:LDH法2017-10-12 20:31:58

    一、效应细胞的制备 激惹5天后,于无菌条件下取出受鼠引流的腹股沟淋巴结,100目钢网研磨,调整细胞浓度为210 7 .ml -1 。台盼蓝色要求存活率95%。 二、靶细胞的制备 P815细胞株系DBA/2小鼠的肥大细胞瘤细胞株。连续传代培养,调整细胞浓度为210 5 /ml或3.33...

  • 靶细胞杀伤实验:Cr51法2017-10-12 20:31:14

    一、原理 用Na2 51 CrO 4 标记靶细胞,若待检效应细胞能杀伤靶细胞,则51 Cr( 铬) 从靶细胞内释出。以计数仪测定释出的51 Cr 放射活性,靶细胞溶解破坏越多,51 Cr 释放就越多,上清液的放射活性也就越高,应用公式可计算出待检效应细胞的杀伤活性。 二、步骤...

  • 靶细胞杀伤实验:CFSE/PI法2017-10-12 20:30:31

    做免疫学特别是肿瘤学实验,总免不了要测淋巴细胞或其他细胞对肿瘤细胞的杀伤,老外最常用的是Cr51放射实验,但这个方法在国内的不少地方都不能做,而MTT这个方法又太老了,而且也不准确,那么替代方法就用流式细胞术,又方便,又准确。 1、计数靶细胞,并加...

  • NK细胞活性测定:同位素法原理和实验步骤2017-10-12 20:29:41

    一、原理 将用同位素3H-TdR标记的靶细胞与淋巴细胞共同培养时,靶细胞可被NK细胞杀伤。同位素便从被杀伤的靶细胞中释放出来,其释放的量与NK细胞活性成正比。通过测定靶细胞3H-TdR的释放率即可反应NK细胞的活性。 二、仪器和材料 液体闪烁仪、多头细胞取集器...

  • 迟发型变态反应(DTH)检测:耳肿胀法2017-10-12 20:27:25

    一、原理 二硝基氟苯(DNFB)是一种半抗原,将其稀释液涂抹腹壁皮肤后,与皮肤蛋白结合成完全抗原,由此刺激T淋巴细胞增殖成致敏淋巴细胞。4~7天后再将其涂抹于耳部,使局部产生迟发型变态反应。一般在抗原攻击后24~48h达高峰,故于此时测定其肿胀程度。 二...

  • 细胞增殖检测:3H-TdR渗入法原理和操作步骤2017-10-12 20:26:33

    一、原理 T细胞、B细胞表面具有识别抗原的受体和有丝分裂原受体,在特异性抗原刺激下可使相应淋巴细胞克隆发生增殖。植物血凝素(PHA)、刀豆蛋白A(ConA),抗CD2、抗CD3McAb作为多克隆刺激剂可选择性地刺激T细胞增殖;而抗IgM、含葡萄球菌A蛋白的菌体(SAC...

  • 靶细胞杀伤实验总论 22017-10-12 20:25:56

    2、流式细胞标记法 (1)PE-mAb/FITC-annexin V 荧光标记法 正常细胞的磷酯酰丝氨(phosphatidylserine,PS)位于细胞膜内表面,细胞凋亡时翻转露于膜外侧,可与annexinV高亲合力结合。研究发现PS外翻为细胞凋亡的早期事件,先于膜通透性增加所51Cr或其他染料...

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