怎样用放射免疫法测乙酰胆碱受体抗体?
先用125I标记烟碱样拮抗剂α-银环蛇毒素,而后用此结合物与可溶性人肌肉乙酰胆碱受体特异性结合,再用此结合物与病人血清免疫球蛋白发生沉淀反应。通过测定其放射活性来反映其乙酰胆碱受体抗体含量。用免疫沉淀法测定乙酰胆碱受体抗体的基本原理是先由人截肢小腿腓肠肌提取乙酰胆碱受体,于-70~-80℃保存备用,其浓度为5~10nmol/L。把提取的乙酰胆碱受体与用125I标记的α-银环蛇毒素相互作用,结合成125I-α-银环蛇毒素-乙酰胆碱受体。再加入重症肌无力病人的血清(含乙酰胆碱受体抗体,即人IgG),形成125I-α-银环蛇毒素-乙酰胆碱受体-乙酰胆碱受体抗体-人IgG抗体复合物沉淀,最后测定此复合物的125I放射活性。待测标本中乙酰胆碱受体抗体含量(C)的计算方法及单位如下:C=(待测标本测得cpm-正常混合血清cpm)×待测标本测得IgG值/正常混合血清cpm×正常混合血清IgG值(任意单位/升:arbitraryunit/L)。cpm为放射性核素测定单位,即每分钟内的计数。
82在乙酰胆碱受体抗体检测系统中怎样对乙酰胆碱受体进行选择?历史上在乙酰胆碱受体抗体检测系统中曾先后用过提取乙酰胆碱受体的组织来源依次为:电鳗电器官、大鼠正常和失神经的腓肠肌、人腓肠肌。用由人腓肠肌提取的乙酰胆碱受体辅以直接封闭抗体检测,则重症肌无力病人血清中乙酰胆碱受体抗体的检出率为95%,而用由大鼠腓肠肌提取的乙酰胆碱受体其相应抗体的检出率仅为50%。在此检测系统中乙酰胆碱受体抗体的检出率,以用由重症肌无力病人腓肠肌提取的乙酰胆碱受体为最佳,失神经的人腓肠肌其次,大鼠去神经的肌肉更次,电鳗电器官提取的乙酰胆碱受体检测效果最差。