各种浓度PAGE胶的配制（DNA电泳用） 50ml体系： 丙烯酰胺 有效分离（bp) 二甲苯青 溴酚蓝 丙烯酰胺30%（ml） 10TBE（ml) ddH2O（ml） TEMED（l） 过硫酸铵10%（l） 3.5% 100-1000 460 100 5.83 5 39.17 25.0 250 5.0% 100-500 260 65 8.33 5 36.67 25.0 250...

2、反应混合液配制 在0.5mL Eppendorf管中加入下列试剂： 稀释DNA 2 L primer 各0.5 L 10PCR Buffer 2.5 L dNTP 2 L MgCl2 1.5 L Taq酶 0.2 L 加dd H20至总体积 25 L 加完样后，加一滴石蜡油，离心混匀。放入PCR仪，盖好盖子。 3、SSR扩增程序 94℃ 3 min 94...

相关知识 SSR简介 所有真核生物基因组中都有一类叫微卫星（microsatellite）或简单序列重复（simple sequence repeats）的序列，它是由2-5个核苷酸首尾相连重复多次构成的一段DNA序列，具有很强的保守性。可以根据这段序列两边的序列设计引物，用PCR方法扩增...

原理] 蛋白质在十二烷基硫酸钠（SDS）和巯基乙醇的作用下，分子中的二硫键还原，氢键等打开，形成按1.4gSDS/1g蛋白质比例的SDS-蛋白质多肽复合物，该复合物带负电，故可在聚丙烯酰胺凝胶电泳中向正极迁移，且主要由于凝胶的分子筛作用，迁移速率与蛋白质的分...

3．制备凝胶板 不连续体系采用不同孔径及pH的分离胶与浓缩胶 ，凝胶制备应分2步进行。 ① 分离胶的制备：根据实验要求，选择最终丙烯酰胺的浓度，本实验需20ml pH8.9 7.0 %PAA溶液，其加胶方式不同于连续系统。混合后的凝胶溶液，用细长头的滴管加至长、短玻...

③ 分析纯过硫酸胺（AP）（AR） 0.14g加重蒸水至100ml，置棕色瓶，4℃储存仅能用一周，最好当天配制。上述3种试剂用于制备分离胶。 ④ 浓缩胶缓冲液：称取1mol/L HCl 48ml，Tris5.98g，TEMED 0.46ml，加重蒸水至80ml,调pH6.7，用重蒸水定容至100ml，置棕色瓶...

（一）原 理 由于聚丙烯酰胺凝胶的浓度可以按要求配制，因此可以形成连续系统和不连续系统两种电泳系统。不连续系统最大的特点在于大大提高了样品分离的分辨率。这种电泳的主要特点是：（1）使用两种不同浓度的凝胶系统；（2）配制两种凝胶的缓冲溶液成分及pH...

2．分子筛效应 分子量或分子大小和形状不同的蛋白质通过一定孔径分离胶时，受阻滞的程度不同而表现出不同的迁移率，这就是分子筛效应。 经上述浓缩效应后，快、慢离子及蛋白质均进入pH8.9的同一孔径的分离胶中。此时，高电压消失，在均一的电压梯度下，由于甘...

二、聚丙烯酰胺凝胶电泳原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳（polyacryamide gel electrophoresis，简称PAGE）根据其有无浓缩效应，分为连续系统与不连续系统2大类，前者电泳体系中缓冲液pH值及凝胶浓度相同，带电颗粒在电场作用下，主要靠电荷及分子筛效应；后者电泳体...

聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺（acrylamide，简称Acr）和交联剂又称为共聚体的N, N-甲叉双丙烯酰胺（methylene-bisacrylamide，简称Bis）在加速剂和催化剂的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶，以此凝胶为支持物的电泳称为聚丙烯酰胺凝胶电泳简称PAGE）...