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  • 聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis,PAGE)2017-10-14 22:06:26

    配制 Tris- 甘氨酸 SDS-PAGE 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶所用溶液 溶液成分 不同体积( ml )凝胶液中各成分所需体积( ml ) 5 10 15 20 25 30 40 50 6% SDS-PAGE 水 2.6 5.3 7.9 10.6 13.2 15.9 21.2 26.5 30% 丙烯酰胺溶液 1 2 3 4 5 6 8 10 10% SDS 0.05 0...

  • 银染(silver staining)操作规程2017-10-14 22:05:43

    实验原理:在碱性条件下,用甲醛将蛋白带上的硝酸银(银离子)还原成金属银,以使银颗粒沉积在蛋白带上。染色的程度与蛋白中的一些特殊的基团有关,不含或者很少含半胱氨酸残基的蛋白质有时候呈负染。银染的详细机制还不是非常清楚。 试剂:乙醇、冰醋酸、乙...

  • SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳实验原理和操作步骤2017-10-14 22:05:00

    实验目的:测定蛋白质亚基的分子量及纯度 实验原理:在样品介质和聚丙烯酰胺凝胶中加入离子去污剂和强还原剂后,蛋白质亚基的点泳迁移率主要取决于亚及分子量的大小,而电荷因素可以被忽略。当蛋白质的分子量在15KD到200KD之间时,电泳迁移率与分子量的对数呈...

  • PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)实验2017-10-14 22:04:18

    【实验原理】 聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacryamide gel electropHoresis, PAGE)是由丙烯酰胺单体和交联剂甲叉双丙烯酰胺在催化作用下形成的三维网状结构物质。在不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳中,凝胶的制作是分层进行的,因此凝胶不仅有分子筛效应,还具有浓缩效应...

  • r-hGH中间体SDS-PAGE电泳标准操作规程(SOP)-32017-10-14 22:03:37

    4.上样 1)上样前在已制好胶的电泳槽中倒入电泳缓冲液,液面高度应超过上槽短玻璃板的上缘5mm,下槽只要超过电极丝即可。 2)双手缓慢小心地取出样品梳,即可看到界线清晰的加样孔。如加样孔之间的胶条不平整,可用一平头针注射器校正。 3)用微量进样器吸取...

  • r-hGH中间体SDS-PAGE电泳标准操作规程(SOP)-22017-10-14 22:02:55

    三.操作方法 1.夹心式垂直电泳槽使用方法 1)清洗部件:用去污剂清洗长短玻璃板、胶模框及样品梳,用自来水彻底冲洗,再用去离子水不洗净,放置晾干或用滤纸擦干(注意不要留下纤维)待用。如有必要,也可先用5% KOH甲醇溶液(5g KOH溶于100ml甲醇)清洗玻...

  • r-hGH中间体SDS-PAGE电泳标准操作规程(SOP)-12017-10-14 22:02:09

    目的:规范生长激素中间体的电泳检测 一.仪器装置 1.电泳仪 2.夹心式垂直电泳槽 3.玻璃板:长14.511.52mm、短14.011.52mm 4.可调微量移液器 5.微量进样器 6.转移脱色摇床 二.试剂配制 1.丙烯酰胺液(30%T/2.7%C) 用天平分别称取58.4g丙烯酰胺(Acr...

  • SDS-PAGE的影响因素2017-10-14 22:01:25

    1. 带电颗粒的性质 净电荷多少、颗粒大小及形状。一般净电荷多,直径小而且近于球状,则泳动速度快,反之则慢。 2. 电场强度(电位梯度) 指单位长度(cm)支持物体上的电位降,它对泳动度起着十分重要的作用。一般电场强度越高,带电颗粒移动速度越快。根据...

  • SDS-PAGE实验方法2017-10-14 22:00:44

    试剂: 1. 5x样品缓冲液(10ml):0.6ml 1mol/l的Tris-HCl(pH6.8),5ml 50%甘油,2ml 10%的SDS,0.5ml巯基乙醇,1ml 1%溴酚蓝,0.9ml蒸馏水。可在4℃保存数周,或在-20℃保存数月。 2. 凝胶贮液:在通风橱中,称取丙烯酰胺30g,甲叉双丙烯酰胺0.8g,加重蒸水溶...

  • 等电聚焦注意事项2017-10-14 22:00:02

    1.等电聚焦后可用一根染色的细线(0.1mm)标出染料前沿的位置; 2.不同品牌的载体两性电解质性质上有细微的差别,使用不同来源的载体两性电解质凝胶时候蛋白质分离样式略有差异,若要获得最好的重复性一般不要更换载体两性电解质的品牌; 3.通常,窄范围的pH...

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