我们做蛋白质电泳的人都知道，银染色很灵敏，有很强的说服力，但通常胶背景较深，不易扫描。在这里介绍一下低背景的蛋白质银染方法。 Step Reagent Time/min Fix 50%EtOH, 12%HAC, 0.1%HCHO, 38%H2O 60 Rinse 50% EtOH 5 min, 3 times Sensitive 0.02% Na2S2O...
凝胶干燥时遇到的主要问题是凝胶的变形和破裂。将凝胶放在Whatman 3MM滤纸上可防止干燥凝胶变形，但凝胶是否破裂取决于凝胶的厚度和干燥器的质量，因此，应尽量使用薄胶并使凝胶干燥器处于良好状态，使其真空压力波动极少。 (1)试剂与配制：固定液：冰醋酸:甲...
聚丙烯酰胺的特性，包括机械性能，弹性，透明度，孔径大小取决于T，C，T是两个单体(单体丙烯酰胺和N-N-甲叉双丙烯酰胺)的总百分浓度，C 是与总浓度有关的交联百分比浓度。 T=(a+b)/m C=b/(a+b) （a为单体丙烯酰胺的克数，b为N-N-甲叉双丙烯酰胺的克数，m为缓...
载体两性电解质必备的条件： 1.可溶性要好，为了保证等电聚焦过程中PH梯度的形成和蛋白样品的迁移，载体两性电解质必须具有很好的溶解性能。 2.紫外吸收低，不发荧光。由于制备分离时，检测蛋白质的方法通常是测量280cm的吸光度，因此要求载体两性电解质在28...
等电聚焦凝胶电泳是依据蛋白质分子的静电荷或等电点进行分离的技术，等电聚焦中，蛋白质分子在含有载体两性电解质形成的一个连续而稳定的线性pH梯度中电泳。载体两性电解质是脂肪族多氨基多羧酸，在电场中形成正极为酸性，负极为碱性的连续的pH梯度。蛋白质分...
一、实验目的 了解等电聚焦的原理。通过蛋白质等电点的测定，掌握聚丙烯酰胺凝胶垂直管式等电聚焦电泳技术。 二、实验原理 等电聚焦（Isoelectric focusing，简称IEF）是六十年代中期出现的新技术。近年来等电聚焦技术有了新的进展，已迅速发展成为一门成熟...
问 题 可能原因 建议解决方法 推荐电压条件下电泳时间过长 电泳缓冲液过稀 配制新鲜缓冲液，使用1X稀释液 推荐电压条件下电流过高，热量过大 电泳缓冲液过稀 配制新鲜缓冲液，使用1X稀释液 推荐电压条件下电流过低或无电流 接触不良 在电泳前移除胶盒底部的...
问题 原因 对策 背景高 SDS及盐类等杂质未除尽 电泳结束后，取胶放入双蒸水或去离子水中，延长洗涤时间或增加洗涤次数。 染色过程中试剂变成蓝色 染色后未见 蛋白条带 SDS及盐类等杂质未除尽 电泳结束后，取胶放入双蒸水或去离子水中，延长洗涤时间或增加洗...
Invitrogen提供了大量的涵盖面广的蛋白分离预制胶，包括不同的成分，百分比浓度和格式。使用合适的胶百分比浓度，缓冲系统，上样孔格式以及胶的厚度，对于获得最好的结果非常重要。以下提供了帮助你选择适合你应用的正确凝胶的信息。 E-PAGE 96 High-Throughp...
实验试剂： 试剂贮备液： 1、 1mol/L HCl48ml，Tris36.6g，TEMED0.23ml，加蒸馏水配成100ml，pH8.9。 2、 1mol/L HCl48ml，Tris5.98g，TEMED0.46ml，加蒸馏水配成100ml，pH6.7。 3、 Acr28g，Bis0.735g，加蒸馏水配成100ml。 4、 Acr10g，Bis2.5g，加蒸馏水配...