PCR技术必须有人工合成的合理引物和提取的样品DNA，然后才进行自动热循环，最后进行产物鉴定与分析。引物设计与合成目前只能在少数技术力量较强的研究院、所进行，临床应用只需购买PCR检测试剂盒就可开展工作，PCR自动热循环中影响因素很多，对不同的DNA 样品...
开展 PCR 应具有一定的条件。需要一个正规的 pCR 实验室，采集标本、核酸提...
第三节 有效数字及运算规则 一、 有效数字 为了取得准确的分析结果，不仅要准确测量，而且还要正确记录与计算。所谓正确记录是指记录数字的位数。因为数字的位数不仅表示数字的大小，也反映测量的准确程度。所谓有效数字，就是实际能测得的数字。 有效数字保...
（3） 人员误差 由于测定人员的分辨力，反应速度的差异和固有习惯引起的误差称人员误差。这类误差往往因人而异，因而可以采取让不同人员进行分析，以平均值报告分析结果的方法予以限制。 （4） 环境误差 这是由于测定环境所带来的误差。例如室温、湿度不是所...
在任何一项分析中，我们都可以看到用同一种方法分析，测定同一样品，虽然经过多次测定，但是测定结果总不会是完全一样，这说明测定中有误差。为此我们必须了解误差的产生原因及其表示方法，尽可能地将误差减小到最小，以提高分析结果的准确度。 一、准确度与...
随着分子生物学研究发展的不断广泛和深入，PCR已成为一门相当成熟的常规技术，而热聚合酶（即Taq酶）的合理选择是PCR成败与否的一个关键因素。目前市面上有多种Taq酶，能够满足多方面的实验需要。那么，如何选择最合适的Taq酶？根据用户经常考虑的指标，如特...
首先引物要跟模板紧密结合，其次引物与引物之间不能有稳定的二聚体或发夹结构存在，再次引物不能在别的非目的位点引起DNA聚合反应（即错配）。围绕这几条基本原则，设计引物需要考虑诸多因素，如引物长度（primer length）、产物长度（product length）、序列...
1．常规程序 将 PCR 反应所需的成分配置完后，在 PCR 仪上于 94-96℃ 预加热几十秒至几分钟，使模板 DNA 充分变性，然后进入扩增循环。在每一个循环中，先于 94℃ 保持 30 秒钟使模板变性，然后将温度降到复性温度（一般 50-60℃ 之间），一般保持 30 秒钟，...
1．缓冲液 标准的缓冲液含 10mM TrisHCl ， pH 为 8.3-9.0（室温），而在延伸温度（72 ℃）下，pH 值接近 7.2 。缓冲液中含有一种二价阳离子，用于激活 DNA 聚合酶的活性中心，一般使用 Mg2+ ，有时使用 Mn2+ 。一般以 MgCl2 的形式提供，标准浓度为 1.5mM 。...
实验目的] 了解聚合酶链反应（PCR）的基本原理及其影响因素，掌握PCR的基本操作过程。 [仪器] PCR仪、台式离心机、电泳仪、电泳槽、紫外检测仪 [试剂] 1、引物：用去离子水配成10 mol /L。 2、Taq聚合酶 3、10PCR反应缓冲液（加镁离子） 4、dNTPs：四种核苷酸...