实验原理] 聚合酶链式反应（polymerase chain reaction）即PCR技术是美国Cetus公司人类遗传研究所的科学家K.B.Mullis于1983年发明的一种体外扩增特定基因或DNA序列的方法。PCR具有很高的特异性、灵敏度，在分子生物学、基因工程研究、某些疾病的诊断以及临床...
（四）Taq DNA聚合酶的量 典型PCR反应混合物中，所用酶浓度为2.5U/l，常用范围为1～4U/100l。由于DNA模板的不同和引物不同，以及其它条件的差异，多聚酶的用量亦有差异，酶量过多会导致非特异产物的增加。 由于生产厂家所用兵配方、制造条件以及活性定义不同...
二、PCR反应系统的组成 （一）PCR缓冲液（PCr Buffer） 用于PCR的标准缓冲液见PCR操作范例。于72℃时，反应体系的pH值将下降1个单位，接近于7.2。二价阳离子的存在至关重要，影响PCR的特异性和产量。实验表明，Mg2+优于Mn2+，而Ca2+无任何作用。 1．Mg2+浓度M...
一、PCR操作范例 在一个典型的PCR反应体系中需加入：适宜的缓冲液、微量的模板DNA、4dNTPs、耐热性多聚酶、Mg 2+ 和两个合成的DNA引物。模板DNa 94℃ 变性1min，引物与模板40～60℃退火1min，72℃延伸2min。在首次循环前模板预变性3～5min；在末次循环后，样...
PCR反应条件三要素为温度、时间和循环次数。 温度与时间的设置 基于PCR原理三步骤而设置变性-退火-延伸三个温度点。在标准反应中采用三温度点法，双链DNA在90～95℃变性，再迅速冷却至40 ～60℃，引物退火并结合到靶序列上，然后快速升温至70～75℃，在Taq DN...
PCR技术已经在生物学研究和临床医学检验领域中得到了广泛的应用，PCR技术也日臻完善。PCR技术操作简便，特异性强，敏感度极高，正因为敏感度高，很容易受其他因素的影响，因此要得到准确可靠的反应结果，需根据不同的模板，摸索最适合的条件，配制出PCR反应试...
实验目的 为了获得大量的AKP基因，我们需要将目的基因通过PCR扩增基因剂量，方便下一步实验作基因重组。 我们需要注意PCR产物的准确性和产率。特别注意引物、复性温度、TaqE对准确性的影响和延伸时间（1000bp/min）、Mg 2+ 浓度、循环数（小于等于30）对产率...
RN A提取方法 下面以异硫氰酸胍结合氯仿-酚提取法介绍RNA的提...
标本的保存 血清（浆） HBV：分离出的血清（浆）如不立即提取核酸，保存于-20℃待检。 HCV：尽快分离血清(浆), 如不立即提取RNA， 保存于-20℃待检。 长期保存：吸取200l血清，加20u RNasin（RNA酶抑制剂），保存于-70℃。 已发出结果报告的标本应及时转移至...
应用聚合酶链反应（PCR）技术测定临床标本中的病原体核酸成分，是一种高度敏感，且最为直接的检测手段。由于临床标本中含有蛋白质、脂类等物质，可干扰PCR反应，故在做PCR反应前必须进行核酸提...