准备工作 （1）试管、试管架、滴管、吸管、小鼠固定架、玻璃瓶、玻璃皿、烧杯、橡皮头、剪刀、镊子、纱布、棉球、酒精灯、滴管、移液器、细胞计数器、生理盐水、PBS、双抗（青链霉素）、75%酒精、95%酒精、培养瓶（50ml，260ml）。 （2）BALB/C小鼠（4~5周龄...

从孕17-18天的雌鼠的胎儿分离神经元细胞。孕雌鼠麻醉然后解剖，胎儿收集到HBSS-1中然后快速断头。剥离脑膜和白质后，大脑皮质收集入 HBSS-2 液中机械磨碎。皮质碎片移到有0.025%胰酶的HBSS-2液中37C消化15分钟。胰酶消化后，细胞用含有10%胎牛血清的HBSS-2液...

少突胶质细胞来源于1-2 天的大鼠。断头后大鼠大脑收集到Hams F-12培养液中，移除脑膜和血管。皮质用机械匀浆进行匀浆然后将细胞悬液依次通过230m和104m尼龙网进行过滤。细胞通过1000rpm 7分钟离心进行收集，用添加12.5%胎牛血清的DMEM进行重悬细胞。最后以2.0...

星形胶质细胞来源于2天的大鼠。断头后的大鼠大脑收集在含有11mM 碳酸氢钠，71mM葡萄糖和1%抗菌素的DMEM溶液中。移除脑膜，血管和白质。大脑皮层用机械分裂法进行匀浆，然后将细胞悬液经230m，104m 和73.3m孔的铁丝网依次过滤。然后用700g 速度10分钟离心收集...

混合胶质细胞培养来源于1-2天的大鼠，如同星形胶质细胞培养，有轻微的改动。乳鼠断头后大脑收集在DMEM-Hams F-12含有1%抗菌素的溶液中。除去脑膜，血管和白质后，用机械匀浆法将大脑皮层匀浆，然后将细胞悬液依次通过230m和104m孔径的钢网过滤，然后用离心法...

化学名：2-[4-（2-Hydroxyethyl）-1-piperazinyl] ethanesulfonic acid 中文名：羟乙基哌嗪乙硫磺酸 分子式：C8H18N2O4S 分子量：238.3 HEPES是一种非离子两性缓冲液，其在pH 7.2 - 7.4 范围内具有较好的缓冲能力。其最大优点是在开放式培养或细胞观察时能维...

一、取材的基本要求 （1）取材要注意新鲜和保鲜 新鲜组织易于培养成功，取材时应尽量在4~6h内能制作成细胞，尽快入箱培养，若不能即时培养，应将组织浸泡于培养液内，于4℃存放。若组织块较大，应在清除表面血块、坏死组织、脂肪和结缔组织后，切碎于培养液内...

一、传代细胞的传代培养 （1）吸除或倒掉原瓶中的旧培养基（以25mL培养瓶为例）。 （2）每瓶加入2mL,无钙、镁PBS，漂洗一次后倒掉。 （3）每瓶加入1mL消化液（0.25%胰蛋白酶或0.02%EDTA或混合液），轻轻摇动培养瓶，经消化液铺满所有细胞表面，待细胞层略有松...

一、原代细胞的培养与维持 1、静置贴壁细胞（包括半贴壁细胞的培养） 凡经消化液处理实体组织来源的细胞要通过充分漂洗，以尽量除去消化液的毒性，细胞接种时浓度要稍大一些，至少为5108细胞/L,培养基可用 Eagle（MEM）或DNEM培养，小牛血清浓度为10%~80%。在...

三、原代细胞的培养方法 原代细胞的培养也叫初代培养 是从供体取得组织细胞在体外进行的首次培养，是建立细胞系的第一步，是一项基本技术。原代细胞因刚从组织中分离开，生物学特性未发生很大变化，仍保留原来的遗传特性，也最接近和反映体内生长特性，适宜用...