一 原理： 来源于同一个体或组织，能催化同一反应，而蛋白结构不同的酶称为同工酶。 同工酶的蛋白结构有差别，它们的理化性质也就有所差异。因此可用电泳或其它方法将它们分离开来。例如乳酸脱氢酶(LDH)同工酶，它们都能催化乳酸脱氢产生丙酮酸，但经电泳法分...
堆积和pH值在SDS PAGE系统的相对的重要性 我们经常被问到，是否Novex预制胶有浓缩胶，如果有，pH是多少。答案是肯定的，有浓缩胶（Novex，Tris-glycine，和Trince胶)，但是浓缩胶和分离胶之间的pH值相同。 pH值的变化依赖于胶的成分。请参看每一个产品以确定p...
解离/非解离native缓冲液系统 很多应用蛋白质聚丙烯酰胺凝胶区带电泳（zone electrophoresis）的研究使用一种缓冲液系统，该系统的设计把所有的蛋白质分解成单一多肽亚单位。最常用的解离试剂是十二烷基硫酸钠（SDS）,一种离子型去污剂，它通过包围在多肽骨架...
HP-RPC的选择首先要看蛋白质的分子量，20kDa左右的一般用C4或C8，再小一点的可以用C18，太大的蛋白并不适于反相分离。C18通用性最好，但是有时候保留过强可能会导致收率较低。如果目的蛋白不是很针对，可以考虑通用性最强的C18柱。 一般来说，4.6mm的内径比较...
Protein表达是一个非常复杂的过程，因此很难预测表达的蛋白是否是可溶性的、包涵体形式还是部分降解的。为了预防各种可能的困难条件，在重组蛋白上导入两种Tag可以提供获得高纯度均质蛋白的灵活性。 蛋白含有两种不同亲和纯化Tag的重要原因： 纯化全长的蛋白...
15种蛋白质单晶培养的方法： （1）大量养晶法（bulk crystallization）：若急着养出单晶，则将纯化之蛋白质溶液加入固体盐类或饱和盐液，直到溶液中出现乳白混浊色，离心后把上清液（suppernatant）放置数天至数周，有可能养出单晶。 （2）批次养晶法（batch...
六、SDS-PAGE 1.SDS及SDS-PAGE （1）SDS：十二烷基硫酸钠（sodium decyl sulfate，SDS），一种阴离子去污剂，它能以一定的比例和蛋白质结合，形成一种SDSprotein的复合物。 （2）SDS- PAGE：具有SDS的PAGE，分离SDSprotein复合物，通常把这种电泳称为SDS-PAGE...
二、透析和超滤 1.透析（Dialysis）： 就是利用蛋白质分子不能通过半透膜（Semipermeable membrane）而小分子可以自由透过的性质，使蛋白质与小分子物质分开。 作用：脱盐、无机离子和小分子物质等。 透析膜：动物膜、羊皮纸、火棉胶、赛璐玢或其他材料等。 2...
第一节 蛋白质分离纯化与鉴定的基本原理 一、蛋白质的理化性质 （一）蛋白质的两性电离 pI：当蛋白质溶液处于某一pH时，蛋白质解离成正、负离子的趋势相等，即成为兼性离子，净电荷为0，此时的溶液的pH称为~。 体内大多数蛋白质：pIpH 5.0。在pH 7.4，大多数...
1.葡萄糖异构酶（GI）在工业上应用广泛，为提高其热稳定性，朱国萍等人在确定第138位甘氨酸(Gly138)为目标氨基酸后，用双引物法对GI基因进行体外定点诱变，以脯氨酸（Pro138）替代Gly138，含突变体的重组质粒在大肠杆菌中表达，结果突变型GI比野生型的热半衰...