4、Loading buffer（10ul每个样） 总体积 100ul 200 ul 500ul 10MOPS 10ul 20 ul 50ul 甲醛 16 ul 32 ul 80 ul 甲酰胺 50ul 100 ul 250ul Dye 20 ul 40 ul 100 ul DEPC H 2 O 4 ul 8 ul 20 ul 注： 不加EB 5、样品准备 将样品保持在冰块中。 5ugRNA+ 10ul lo...
一、 总RNA的提取 1、 取组织10-50毫克，剪切成大小在0.5厘米以内的碎片，加入5的RNA later（约2毫升）。样品在37度可保存1天。室温下1周，4度下1个月。 2、 匀浆： 用Rnase Erase spray（ICN）清理匀浆器头部（7mm），用DEPC水和乙醇清洗，将上述样品用镊子...
AtlasTM cDNA表达距阵(Expression Array) 同时对588种/1176种关键基因做全景表达图谱分析 同时对大量已知基因的表达进行大规模高通量(High-htroughput)分析 检测关键基因在细胞关键功能中的角色 只需简单的杂交步骤 就在数年前，核酸矩阵技术只能在资金雄厚的...
1. 取RNA 2. 将电泳槽和板，梳齿浸泡在3%H2O2中20-30分钟，并吹干 3. 跑 1%琼脂糖凝胶，检测样本RNA含量 4. 变性胶 在桌面上利用保险膜铺出一块干净的区域，将1.95g 琼脂糖加入 110ml 的 DEPC-H2O （加热前可在三角瓶上做一个记号，在加热后把蒸发的水分补足...
7.探针的制备 1.在1.5ml离心管中配制以下反应液： 模板DNA(25 ng) 1ul Random Primer 2ul 灭菌水 11ul 总体积：14ul 2.95C加热3分钟后，迅速放置于冰冷却5min。 3.在离心管中按下列顺序加入以下溶液： 10Buffer 2.5ul dNTP Mixture 2.5ul 111 TBq/mmol[a-32P]...
[仪器、试剂、材料] （一）仪器 恒温水浴箱，电泳仪，凝胶成像系统，真空转移仪，真空泵，UV 交联仪，杂交炉，恒温摇床，脱色摇床，漩涡振荡器，分光光度计，微量移液器，电炉（或微波炉），离心管，烧杯，量筒，三角瓶，等。 （二）材料 总RNA样品或mRNA样品...
1） 纯化的RNA的点杂交和狭线杂交 安装印迹装置 1．切一张合适大小的带正电荷尼龙膜。用铅笔标上表示方向的记号。用水把膜简单弄湿，在20SSC中室温泡1 h。 2．在膜浸泡期间，先用0.1 mol/L NaOH小心清洗印迹装置，再用无菌水洗干净。 3．把两片厚滤纸用20SSC...
Northern印迹的制备 预备： 1.按下述步骤，每泳道加10～20g总RNA或 0.5～1gpoly(A)+RNA进行甲醛/ 琼脂糖凝胶电泳，将凝胶放在紫外线透照仪上，旁边置一标尺进行拍照。 a. 总RNA（10～20g）用下列溶液在65℃温育5min： 总RNA（10～20g） 6.0l 甲酰胺 12.5l 10...
【操作】 1．RNA的提取见前。 2．变性胶的制备：取琼脂糖0.2g，加入 DEPC H2O 12.4ml，加热熔化，冷却至 60℃时加入5甲醛凝胶电泳缓冲溶液4.0 、37%甲醛3.6ml、混匀、制胶。待胶凝固后，置于1甲醛凝胶电泳缓冲溶液中预电泳5min。 3．样品制备 取总RNA4.5 ，加...
(4) 将1 ~ 2 l RNA 上样缓冲液加到乙二醛化的RNA 样品中，然后马上把RNA样品加到凝胶加样孔中，留着两边最外面的两个孔不要加样。将RNA 相对分子质量标准参照物加到最外面的孔中。 (5) 以5V/cm 的电压进行电泳，直到溴酚蓝迁移大约8 cm。 (6) 将凝胶放在保鲜...