总RNA提取与Northern杂交（2）

注： 不加EB

5、样品准备

将样品保持在冰块中。

5ugRNA+ 10ul loading buffer

3等份分装 Eppendorf doff 中 （1） 检测 （2）28s 或者Actin （3）有用的RNA

变性：65度，10分钟，然后将样品放到冰块中。

Prepare letter：： 1-2ul letter+10 ul loading buffer

Loading 样品

小心将样品转移到泳道中，吸管头部不能有气泡

电压：90-120V，1小时。

四、Blotting （transfer）

将电泳胶剪切下来检测RNA。

（1）检测RNA：在胶中加入EB染色。

（2）28S和有用的RNA：

加 0.05N NaOH，20分钟。

DEPC H₂O清洗 2-3分钟。

20×SSC 浸泡20分钟。

准备尼龙膜3张和滤纸

转膜：从底部开始

塑料薄膜

滤纸：大小可以盖住20×SSC

胶： 正面向下，以便RNA可以贴着膜，在胶的周围用电影胶片围着。

尼龙膜：一旦用了，就不能够移动了。

滤纸三层：与胶的大小一致。

纸巾：5-8厘米厚。

将上述物品固定后，在上面压一块重物，过夜（或者至少要8小时）