结直肠癌分子检测高通量测序中国专家共识（2021）核心解读

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一、共识核心背景与适用范围

1. 制定背景

• 结直肠癌发病率、死亡率居我国恶性肿瘤前列，约50% 患者初诊或治疗中出现转移，晚期 5 年生存率 < 15%。
• 分子检测是精准治疗前提，NGS因高通量、高效、多基因并行检测优势，成为临床主流，但流程复杂、质控要求高。
• 共识目标：规范NGS 检测全流程（样本、实验、分析、报告、质控），指导临床合理应用与报告解读，支撑靶向 / 免疫治疗与遗传筛查。

2. 适用范围

• 适用人群：所有结直肠癌患者（Ⅰ~Ⅳ 期）的组织 /ctDNA分子检测。
• 检测目的：靶向治疗靶点筛选、免疫治疗获益预测、预后评估、遗传性结直肠癌筛查、疗效监测与耐药机制分析。

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二、必检 / 可选分子标志物与临床意义（核心检测内容）

1. 必检标志物（强推荐）

2. 可选标志物（中 / 弱推荐）

• TMB：辅助免疫治疗获益预测，MSI-H 常伴 TMB-H，但阈值不统一。
• POLE/POLD1：突变提示超突变表型，免疫治疗获益可能更高。
• UGT1A1/DPYD：预测伊立替康 / 氟尿嘧啶毒性，指导剂量调整。
• 遗传性相关基因（APC、MUTYH、EPCAM 等）：筛查FAP、Lynch 综合征、MAP等遗传性结直肠癌。

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三、样本规范（检测准确性基础）

1. 组织样本（首选）

• FFPE 样本：离体30min 内固定于 4% 中性甲醛，大标本固定 6~48h（≤72h），小活检 6~12h；肿瘤细胞占比≥20%，不足需富集；切片≥5 张（10μm）。
• 新鲜 / 冷冻组织：离体 30min 内液氮或 - 80℃保存，避免核酸降解；肿瘤细胞评估同 FFPE。

2. 液体样本（ctDNA，补充）

• 血浆 ctDNA：专用保存管采血，轻柔颠倒混匀，常温转运；EDTA 管采血后 2h 内分离血浆，-80℃保存，避免反复冻融。
• 适用场景：组织不可获取、疗效监测、耐药机制分析、术后 MRD 检测。

3. 样本转运与质控

• 石蜡样本常温运输，血液 / 核酸样本干冰 / 冷藏运输；建立样本接收、登记、质控 SOP，不合格样本拒收并说明原因。

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四、NGS 检测技术规范（全流程质控）

1. 实验室与人员要求

• 符合临床基因扩增检验实验室规范，分区（试剂准备、样本制备、文库构建、测序、分析），避免交叉污染。
• 人员需经NGS 技术、生物信息分析、报告解读培训，持证上岗。

2. 检测流程（湿实验 + 干实验）

（1）湿实验

• 核酸提取：FFPE 样本优先磁珠法，保证提取效率与纯度；ctDNA 采用UMI 技术降低背景错误。
• 文库构建：优先杂交捕获法（覆盖度高、均一性好），其次扩增子法；文库质控（浓度、片段大小、纯度）合格后方可测序。
• 测序平台：优先NMPA 批准平台；测序深度：组织 **≥500×，ctDNA≥10000×；碱基质量值Q30≥80%**。

（2）干实验（生物信息分析）

• 流程：数据质控→序列比对→变异识别→注释→解读；采用多算法验证，提高准确性。
• 关键参数：突变等位基因频率（MAF），组织≥5%、ctDNA≥1% 判读阳性；覆盖度≥98%，关键位点100% 覆盖。

3. 性能验证

• 开展精密度、准确度、敏感性、特异性、可报告范围验证；与Sanger、dPCR、ARMS-PCR等金标准比对，一致性≥95%。

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五、报告规范与解读（临床应用关键）

1. 报告核心内容（必须包含）

• 患者 / 样本 / 检测基本信息、质控指标（肿瘤占比、测序深度、覆盖度、Q30）、检测基因与范围、变异结果（HGVS 命名）、临床意义分级、药物推荐、局限性与建议。

2. 变异分级标准（体细胞突变）

• Ⅰ 级（临床意义明确）：伴随诊断、指南推荐、证据充分（如 RAS/BRAF 突变、MSI-H）。
• Ⅱ 级（潜在临床意义）：有临床研究证据、潜在靶向 / 免疫获益（如 HER2 扩增、NTRK 融合）。
• Ⅲ 级（意义未明）：无明确临床证据，需进一步研究。
• Ⅳ 级（良性 / 可能良性）：多态性、无致病证据。

3. 关键解读要点

• RAS/BRAF：全 RAS（KRAS/NRAS 外显子 2/3/4）野生型方可使用抗 EGFR；BRAF V600E需联合方案。
• MMR/MSI：dMMR/MSI-H 晚期患者优先免疫单药；Ⅱ 期 dMMR 不推荐氟尿嘧啶单药辅助。
• ctDNA：低丰度突变（<1%）需验证；术后 ctDNA 阳性提示高复发风险，可指导强化治疗。
• 遗传性突变：胚系突变需家系验证，指导亲属筛查与干预。

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六、临床应用推荐（分阶段检测策略）

1. Ⅰ~Ⅲ 期（根治性治疗）

• 必检：MMR/MSI（辅助治疗决策、预后、遗传筛查）。
• 可选：RAS/BRAF（复发后治疗参考）、ctDNA MRD（术后复发监测、指导辅助治疗强度）。

2. Ⅳ 期（姑息治疗）

• 一线治疗前必检：RAS（全）、BRAF、MMR/MSI、HER2、NTRK（靶向 / 免疫治疗选择）。
• 进展后 / 后线：重复 NGS 检测耐药机制（如 RAS 突变、BRAF 扩增、MET 扩增），指导换药。
• 全程监测：ctDNA 动态检测疗效与复发。

3. 遗传性结直肠癌筛查

• 所有患者均应行MMR/MSI初筛；dMMR/MSI-H 且BRAF V600E 野生型，需行MMR 基因胚系检测确诊 Lynch 综合征。
• 家族性息肉病（FAP）：行APC胚系检测；无突变则行MUTYH检测。

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七、质量控制与管理（核心保障）

• 全程质控：分析前（样本）、分析中（实验 / 测序）、分析后（分析 / 报告）全流程质控，记录存档。
• 室间质评：参加国家病理质控中心、CAP等室间质评，合格率≥100%。
• 数据安全：原始数据（FASTQ、BAM）保存≥2 年，VCF 文件长期保存；保护患者隐私。

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八、共识核心价值与临床意义

1. 统一标准：明确结直肠癌 NGS 检测的样本、技术、质控、报告、解读全流程规范，解决临床应用混乱问题。
2. 精准指导：覆盖靶向、免疫、遗传、监测全场景，为个体化治疗提供可靠依据，提升疗效、降低毒性。
3. 规范应用：强调必检标志物优先、合理选择 panel、严格质控，避免过度检测与检测不足。
4. 推动实践：为 NGS 在结直肠癌精准医疗中的规范化、标准化、普及化提供权威指导。