高通量基因测序植入前胚胎遗传学诊断和筛查技术规范（试行）

一、规范核心定位

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二、机构与人员基本要求

1. 机构资质

• 必须是具备辅助生殖技术资质的医疗机构，且通过 ** 临床基因扩增检验实验室（PCR）** 验收
• 需建立独立的 PGD/PGS 实验室，分区明确（样品处理、试剂配制、全基因组扩增、文库构建、测序、数据分析）
• 可与合规第三方医学检验所合作测序，但临床决策与报告解读必须由本院完成

2. 人员资质（核心门槛）

• 临床医师：≥2 名副高及以上，具备产前诊断资质，熟悉遗传病与辅助生殖
• 实验室技术人员：≥1 名中级及以上检验师，持临床基因扩增上岗证
• 遗传 / 生物信息人员：≥3 名本科及以上，熟悉 NGS 数据分析与遗传解读
• 所有人员需经专项培训与考核合格后方可上岗

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三、适应证与禁忌证（临床准入红线）

1. PGD（植入前遗传学诊断，针对已知致病风险）

• 单基因遗传病（如地中海贫血、脊髓性肌萎缩症、囊性纤维化等）
• 染色体结构异常（相互易位、罗伯逊易位、倒位、插入 / 缺失 / 重复等）
• 染色体数目异常（如 21 - 三体、18 - 三体、性染色体异常等）
• 有明确家族史的高风险人群

2. PGS（植入前遗传学筛查，针对非整倍体风险）

• 女方 **≥38 岁 ** 高龄助孕
• 反复自然流产：≥3 次；或 2 次流产且 1 次流产物证实染色体 / 基因异常
• 反复种植失败：优质胚胎移植≥3 次，或累计移植≥10 个可移植胚胎仍未孕
• 严重畸精子症、不明原因不孕伴高非整倍体风险者

3. 绝对禁忌证（禁止实施）

• 《母婴保健法》规定不宜生育的严重遗传性疾病
• 目前无法通过 PGD 检测的遗传性疾病
• 其他不适宜实施辅助生殖技术的情况（如严重躯体疾病、精神障碍等）

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四、临床全流程规范（从接诊到随访）

1. 术前评估与知情同意

• 详细采集家族史、孕产史、先证者资料、致病基因检测结果，建档留存
• 夫妇双方签署书面知情同意书，明确告知：检测局限性、误诊风险、嵌合型判读困难、需后续产前诊断验证、胚胎处置原则等
• 核查证件、完善术前检查（染色体核型、致病基因验证、传染病筛查等）

2. 胚胎活检（样本获取，推荐囊胚滋养外胚层）

• 活检时机：
  • 极体活检（第一 / 第二极体）：适用于女方来源遗传风险
  • 卵裂期活检（第 3 天，1–2 个卵裂球）：操作简便，但胚胎损伤风险较高
  • 囊胚期活检（第 5–6 天，滋养外胚层 5–10 个细胞）：规范推荐首选，检测准确性高、对胚胎发育影响小
   
• 样本管理：唯一编号标识，避免混淆；活检后立即处理或按要求冷藏 / 冷冻运输（4–8℃≤4h，-20℃≤72h）
• 活检后胚胎玻璃化冷冻保存，待检测结果明确后再行移植

3. 实验室检测流程（NGS 核心步骤）

1. 全基因组扩增（WGA）：单细胞 / 微量细胞样本扩增，要求扩增效率 > 90%、等位基因脱扣（ADO）率 < 10%
2. 文库构建与测序：
   • PGD（单基因 / 结构异常）：测序深度≥100×，覆盖目标区域
   • PGS（非整倍体筛查）：全染色体覆盖（24 条）、测序深度≥8×，分辨率≥10Mb
    
3. 生物信息学分析：
   • 染色体非整倍体、拷贝数变异（CNV）、单基因突变位点检测
   • 双人独立分析 + 第三人审核，结果一致方可出具报告
   • 嵌合型判读：** 嵌合比例≥30%** 提示异常，<30% 需谨慎评估，诊断不明胚胎禁止移植
    

4. 结果报告与临床咨询

• 报告必须包含：胚胎编号、检测方法、染色体 / 基因结果、风险分级（可移植 / 不可移植 / 可疑）、局限性说明
• 临床医师直接向夫妇双方解读，明确胚胎处置：
  • 可移植：选择最优胚胎移植，告知仍需 ** 产前诊断（羊水 / 绒毛）** 验证
  • 不可移植：废弃或用于科研（需另行知情同意）
  • 可疑 / 嵌合型：充分告知风险，由夫妇自主决策，不推荐优先移植
   

5. 妊娠随访与子代监测

• 移植后常规血 HCG、超声监测妊娠
• 所有妊娠必须行产前诊断（孕 11–13⁺⁶周绒毛活检或孕 16–24 周羊水穿刺），验证 PGD/PGS 结果
• 随访至分娩后 1 年，记录妊娠结局、子代健康状况，建立长期随访档案

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五、质量控制（QC）与质量保证（QA）

1. 实验室质控要点

• 空白对照：每批次设置试剂空白、洗涤液空白，排除污染
• 阳性对照：已知异常样本质控，确保检测准确性
• 重复性验证：同一样本重复检测，一致性 **>99%**
• 室内质控（IQC）：每日运行，记录扩增效率、测序深度、ADO 率等
• 室间质评（EQA）：每年参加国家级 / 省级临检中心PGD/PGS 室间质评，成绩合格

2. 关键技术指标（必须达标）

• 全基因组扩增效率：>90%
• 等位基因脱扣率（ADO）：<10%
• 染色体非整倍体检测一致性：>99%
• 嵌合型检测阈值：≥30%
• 报告审核：双人分析 + 三级审核制度

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六、规范强调的 “红线” 与局限性

1. 严禁行为

• 无资质机构 / 人员开展 NGS-PGD/PGS
• 检测结果未经验证即移植胚胎
• 隐瞒检测局限性、过度承诺准确性
• 滥用 PGS（如无指征的常规筛查）
• 未经同意将胚胎用于科研或商业用途

2. 明确局限性（必须告知患者）

• 无法检测所有基因突变（如低频率突变、复杂结构变异）
• 嵌合型胚胎判读困难，存在假阳性 / 假阴性风险
• 检测结果不能完全替代产前诊断，妊娠后必须验证
• 不保证 100% 避免遗传病患儿出生，仍有极低误诊风险

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七、临床速记要点

1. 机构 + 人员双准入，PCR 实验室 + 专项资质缺一不可
2. PGD 针对已知病，PGS 针对高龄 / 反复流产 / 种植失败
3. 囊胚滋养外胚层活检首选，样本唯一编号、严格冷链
4. NGS 测序深度：PGD≥100×，PGS≥8×，双人审核
5. 嵌合≥30% 异常，诊断不明不移植
6. 所有妊娠必须产前诊断验证，长期随访子代
7. 知情同意全覆盖，明确告知局限性与风险