血清 25 (OH) D 被确定为评估维生素 D 状态的最佳方法（1 级证据，强推荐）。血清 25 (OH) D 是维生素 D 在肝脏代谢的主要产物，其与维生素 D 结合蛋白结合后在血清中循环，测量循环中的 25 (OH) D 被认为是评估个体维生素 D 状态的最佳方法。
在缺乏标准化 25 (OH) D 检测方法的情况下，不同临床实验室的血清 25 (OH) D 水平可能无法比较（2 级证据，强推荐）。临床和研究实验室有必要使用标准化的 25 (OH) D 检测方法，包括应用标准参考物质，并参与维生素 D 外部质量评估计划质量控制项目。
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高危患者：建议对维生素 D 缺乏风险较高的患者检测血清 25 (OH) D（2 级证据，强推荐）。高风险患者包括患有影响维生素 D 代谢和吸收疾病的患者、骨质疏松症或佝偻病 / 骨软化症患者、有跌倒或非创伤性骨折病史的老年人、接受减肥手术的患者、患有衰弱性 / 慢性疾病的人、长时间在室内工作的人、肥胖或原发性甲状旁腺功能亢进患者以及患有肉芽肿性疾病的患者。
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骨质疏松症与血清水平：骨质疏松症患者的血清 25 (OH) D 水平应维持在≥75nmol/L（1 级证据，强推荐）。大多数内分泌学会认为，血清 25 (OH) D 浓度高于 75nmol/L 对于实现健康益处是必要的，有研究表明，血清 25 (OH) D 水平在 75-110nmol/L 左右对预防髋部和非椎体骨折最为有益。
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低风险成年人：对于 50 岁以下维生素 D 缺乏风险较低的成年人，不建议每日补充超过 400IU 的维生素 D 和 1000mg 的钙（1 级证据，弱推荐）。