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  • 醋酸纤维素薄膜(cellulose acetate film)分离血清蛋白2017-10-13 20:40:58

    原理 采用醋酸纤维素薄膜为支持物的电泳方法,叫做醋酸纤维素薄膜电泳。醋酸纤维素,是纤维素的羟基乙酰化所形成的纤维素醋酸酯。将它溶于有机溶剂(如:丙酮、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等)后,涂抹成均匀的薄膜则成为醋酸纤维素薄膜。该膜具有均一的泡沫状的...

  • 血清IgG的分离制备—盐析法2017-10-13 20:40:21

    原理 IgG是免疫球蛋白(Immunoglobulin,简称IgG)的主要成分之一,分子量约为15万~16万,沉降生活费数约为7s。IgG是动物和人体血浆的重要成分之一。血浆蛋白质的成分多达70余种,要从血浆中分离出IgG,首先要进行尽可能除去其他蛋白质成分的粗分离程序,使Ig...

  • 凝胶层析法(凝胶过滤)脱盐和分离蛋白质-22017-10-13 20:39:41

    (3)在开始收集洗脱液的同时检查蛋白质是否已开始流出。为此,由每支收集管中取出1滴溶液置于黑色比色磁盘中,加入1滴20%磺基水杨酸,若呈现白色絮状沉淀即证明已有蛋白质出现,直到检查不出白色沉淀时,停止收集洗脱液。 (4)由经检查含有蛋白质的每管中,...

  • 凝胶层析法(凝胶过滤)脱盐和分离蛋白质-12017-10-13 20:39:02

    原理 凡盐析所获得的粗制蛋白质(盐析得到的IgG)中均含有硫酸铵等盐类,这类将影响以后的纯化,所以纯化前均应除去,此过程称为脱盐(desalthing)。脱盐常用透析法和凝胶过滤法,这两种方法各有利弊。前者的优点是透析后析品终体积较小,但所需时间较长,且...

  • 牛乳中酪蛋白的制备2017-10-13 20:37:59

    实验原理: 牛乳中主要含有酪蛋白和乳清蛋白两种蛋白质。其中酪蛋白占了牛乳蛋白质的80%。酪蛋白是白色、无味的物质。不溶于水、乙醇及有机溶剂,但溶于碱溶液。牛乳在pH4.7时酪蛋白等电聚沉后剩余的蛋白质统称乳清蛋白。乳清蛋白不同于酪蛋白,其粒子的水合能...

  • 血清蛋白的分离——聚丙烯酰胺凝胶电泳法2017-10-13 20:36:34

    实验原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳是以聚丙烯酰胺凝胶为载体的一种区带电泳。该凝胶由丙烯酰胺(Acr)和交联剂N,N甲叉双丙烯聚酰胺(Bis)聚合而成。聚丙烯酰胺凝胶电泳利用电泳和分子筛的双重作用分离物质。 Acr和Bis单独存在或混合在一起时是稳定的,但在具有自...

  • 醋酸纤维薄膜电泳(cellulose acetate membrane electrophoresis2017-10-13 20:35:55

    实验原理 醋酸纤维薄膜电泳是用醋酸纤维薄膜作为支持物的电泳方法。它具有简便、快速、样品用量少,应用范围广,分离清晰,没有吸附现象等优点。目前已广泛用于血清蛋白、脂蛋白、血红蛋白、糖蛋白、多肽、核酸、同工酶及其他生物大分子的分析检测,是医学和...

  • 包涵体(inclusion body)的纯化2017-10-13 20:35:14

    包涵体是外源基因在原核细胞中表达时,尤其在大肠杆菌中高效表达时,形成的由膜包裹的高密度、不溶性蛋白质颗粒,在显微镜下观察时为高折射区,与胞质中其他成分有明显区别。包涵体形成是比较复杂的,与胞质内蛋白质生成速率有关,新生成的多肽浓度较高,无充...

  • 蛋白质纯化离子交换法(ion exchange method)2017-10-13 20:34:36

    各种蛋白质分子上可能带有不同的电性,经过离子交换管柱,可依其分子带电性的差异而分离开来 (Pharmacia 操作手册, Ion Exchange)。 仪器设备: 塑料管柱 (Bio-Rad Econo-Pac column 732-1010, 1.512 cm) 分划收集器 (fraction collector, 另需准备干净...

  • 蛋白质抽取(protein extraction)2017-10-13 20:33:58

    蛋白质在细菌中表现后,以反复的冷冻-解冻方法打破细胞,再用硫酸铵把蛋白质沉淀下来,此步骤可以去除大部份核酸、多醣、脂质等杂物。 仪器用具:恒温震荡培养箱37℃;高速冷冻离心机及离心管 (使用20,000 rpm离心陀)使用高速离心机要注意: 离心机及离心陀...

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