HP-RPC的选择首先要看蛋白质的分子量，20kDa左右的一般用C4或C8，再小一点的可以用C18，太大的蛋白并不适于反相分离。C18通用性最好，但是有时候保留过强可能会导致收率较低。如果目的蛋白不是很针对，可以考虑通用性最强的C18柱。 一般来说，4.6mm的内径比较...
Protein表达是一个非常复杂的过程，因此很难预测表达的蛋白是否是可溶性的、包涵体形式还是部分降解的。为了预防各种可能的困难条件，在重组蛋白上导入两种Tag可以提供获得高纯度均质蛋白的灵活性。 蛋白含有两种不同亲和纯化Tag的重要原因： 纯化全长的蛋白...
15种蛋白质单晶培养的方法： （1）大量养晶法（bulk crystallization）：若急着养出单晶，则将纯化之蛋白质溶液加入固体盐类或饱和盐液，直到溶液中出现乳白混浊色，离心后把上清液（suppernatant）放置数天至数周，有可能养出单晶。 （2）批次养晶法（batch...
六、SDS-PAGE 1.SDS及SDS-PAGE （1）SDS：十二烷基硫酸钠（sodium decyl sulfate，SDS），一种阴离子去污剂，它能以一定的比例和蛋白质结合，形成一种SDSprotein的复合物。 （2）SDS- PAGE：具有SDS的PAGE，分离SDSprotein复合物，通常把这种电泳称为SDS-PAGE...
二、透析和超滤 1.透析（Dialysis）： 就是利用蛋白质分子不能通过半透膜（Semipermeable membrane）而小分子可以自由透过的性质，使蛋白质与小分子物质分开。 作用：脱盐、无机离子和小分子物质等。 透析膜：动物膜、羊皮纸、火棉胶、赛璐玢或其他材料等。 2...
第一节 蛋白质分离纯化与鉴定的基本原理 一、蛋白质的理化性质 （一）蛋白质的两性电离 pI：当蛋白质溶液处于某一pH时，蛋白质解离成正、负离子的趋势相等，即成为兼性离子，净电荷为0，此时的溶液的pH称为~。 体内大多数蛋白质：pIpH 5.0。在pH 7.4，大多数...
1.葡萄糖异构酶（GI）在工业上应用广泛，为提高其热稳定性，朱国萍等人在确定第138位甘氨酸(Gly138)为目标氨基酸后，用双引物法对GI基因进行体外定点诱变，以脯氨酸（Pro138）替代Gly138，含突变体的重组质粒在大肠杆菌中表达，结果突变型GI比野生型的热半衰...
[目的与原理] 掌握血清白蛋白和球蛋白测定的原理和方法，并用盐析法测定水产动物血清中白蛋白和球蛋白的含量。 血清中含有多种不同成分的蛋白质，主要为白蛋白和球蛋白。用盐析法沉淀血清中球蛋白，用双缩脲法测定上清液中白蛋白，同时测定血清总蛋白。血清球...
2. 不可逆的沉淀反应 在发生沉淀反应时，蛋白质的分子内部结构，空间构象遭到破坏，失去其天然蛋白质的性质，这时蛋白质已发生变性。变性后的蛋白质沉淀不能再溶解于原来的溶液中，这种沉淀反应称为不可逆沉淀反应。重金属盐、生物碱试剂、过酸、过碱、加热、...
【目的和要求】 1. 学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法及其原理。 2. 了解蛋白质的两性解离性质。初步学会测定蛋白质等电点的方法。 3. 加深对蛋白质胶体分子稳定因素的认识，了解蛋白质的沉淀反应、变性作用的原理及其相互关系。 【实验原理】 （一）...