[实验原理] 大肠杆菌表达蛋白以可溶和不溶两种形式存在，需要不同的纯化策略。现在，许多蛋白质正在被发现而事先并不知道它们的功能，这些自然需要将蛋白质分离出来后，进行进一步的研究来获得。分析蛋白质的方法学现已极大的简化和改进。必须承认，蛋白质纯...

一、原理 醋酸纤维薄膜电泳是用醋酸纤维素薄膜作为支持物的电泳方法。带电颗粒在电场力作用下，向着与其电性相反的电极移动的现象称为电泳。由于各种蛋白质都有特定的等电点，如将蛋白质置于pH值低于其等电点的溶液中，则蛋白质将带正电荷而向负极移动。反之...

7．低相对分子质量标准蛋白质（上海产），开封后溶于200ml 重蒸水，加200ul2 倍样品缓冲液（还原缓冲液），分装20 小管，-20℃ 保存。临用前沸水浴3-5min。其相对分子质量如下： 标准蛋白质 Mr 兔磷酸化酶B 97400 牛血清白蛋白 66 200 兔肌动蛋白 43 000 牛...

VI 凝胶层析法分离纯化蛋白质 一、目的 了解凝胶层析的基本原理，并学会用凝胶层析分离纯化蛋白质。 二、原理 凝胶层析也称凝胶过滤、凝胶过滤层析、分子排阻层析和分子筛层析。凝胶是具有一定孔径的网状结构物质，凝胶层析是一种分子筛效应，主要用于分离分...

（五）操作 1．直接测定法 在紫外分光光度计上，将未知的蛋白质溶液小心盛于石英比色皿中，以生理盐水为对照，测得280nm 和260nm 两种波长的吸光度。将280nm 及260nm 波长处测得的吸光度按下列公式计算蛋白质浓度。 C = 1.45A280 0.74A260 式中C：蛋白质质量...

V 蛋白质含量测定 一、双缩脲法测定蛋白质浓度 （一）目的 了解并掌握双缩脉法测定蛋白质浓度的原理和方法。 （二）原理 具有两个或两个以上肽键的化合物皆有双缩脲反应，在碱性溶液中蛋白质与硫酸铜形成紫色络合物，在 540nm 处有最大吸收。在一定浓度的范围...

一、试剂和器材 1．试剂 (1）消化液30％过氧化氢与硫酸与水的比例为3:2:1，即在1 份的蒸馏水中缓慢加入2 份的硫酸，待冷却后，将其加到3 份的过氧化氢中。临用时配制。 (2) 催化剂 硫酸铜（CuSO45H2O ）与硫酸钾（K2SO4）以1 : 3 配比研磨混合。 (3）40 ％氢...

二、组织样品 在生化实验中，经常利用离体组织研究各种物质代谢途径和酶系的作用。或者从组织中分离、纯化核酸、酶以及某些有意义的代谢物质进行研究。 但是，在生物组织中，因含有大量的催化活性物质，离体组织的采集必需在冰冷条件下进行，并日需尽快完成测...

血液及组织样品的制备 分析组织中某种物质的含量、探索物质代谢的过程和规律，经常使用动物的肝、肾、脑、粘膜和肌肉等组织，也选用全血、血浆、血清或者无蛋白血滤液等血液样品，有时也采用尿液、胃液等完成各种生化实验。掌握以上各种实验样品的正确处理和...

一、样品的浓缩 生物大分子在制备过程中由于过柱纯化而样品变得很稀，为了保存和鉴定的目的，往往需要进行浓缩。常用的浓缩方法的： 减压加温蒸发浓缩 通过降低液面压力使液体沸点降低，减压的真空度愈高，液体沸点降得愈低，蒸发愈快，此法适用于一些不耐热...