一、实验目的 1.掌握酶分离纯化的一般步骤及相关原理; 2.悉碱性磷酸酶的分离纯化的方法步骤。 二、实验原理 有机溶剂分级沉淀是分离蛋白质的常用方法之一。有机溶剂能使许多溶于水的酌生物大分子发生沉淀,其主要作用是降低水溶液的介电常数。例如20℃时水的...
一、实验目的 熟悉植物叶蛋白的几种提取原理和方法,了解其意义及其应用价值。 二、实验原理 植物叶蛋白或称绿色蛋白浓缩物 (leaf protein concentration,简称LPC),是从新鲜植物叶片中提取的高质量浓缩蛋白质,不仅是畜禽生长发育和生产畜产品的主要营养物...
一、实验目的 1、掌握一种提取蛋白的方法。 2、掌握一种检测牛乳质量的方法。 二、 实验原理 酪蛋白是乳蛋白质中最丰富的一类蛋白质,约占乳蛋白的80~82%,酪蛋白不是单一的蛋白质,是一类含磷的复合蛋白质混合物,以一磷酸酯键与苏氨酸及丝氨酸的羟基相结合...
一) 原理 将SPA偶联至Sepharose-4B上后,利用亲和层析来提取人和某些动物的IgG,这样可以省去制备第二抗体。该法特别适用于单克隆抗体的研究。该法提取IgG与利用IgG纯化SPA原理是一致的。 (二) 材料与试剂 1.Sepharose-4B 琼脂糖 2.SPA 3.溴化氰 4.0.10M...
(一) SPA的提取 SPA提取的方法很多,包括煮沸法、溶菌酶法、葡萄球菌溶素法、超生波法以及三氯醋酸法等。现将常用的方法介绍如下: 1.煮沸提取法 ⑴ 将菌株接种于蛋白胨葡萄糖琼脂培养基上,37℃培养20h~24h。 ⑵ 以 0.15mol/L pH5.9PB液将菌苔洗下,配成1...
(一)试剂及配制 1.饱和硫酸铵液 2.各种磷酸盐缓冲液 ⑴ 0.2mol/L原液 ⑶ 0.005Mol/L pH8.0 PB 液 取0.10Mol/L pH8.0 PB液100ml,加H2O至2 000ml ⑷0.025 Mol/L pH8.0 PB 液 取0.10Mol/L pH8.0 PB液500ml,加水至2 000ml。 ⑸ 0.035 Mol/L pH8.0 PB液 取0....
⑴ 区带电泳:玻片琼脂或醋酸纤维膜电泳均可。加样电泳后,只在球蛋白的迁移部位出现一条带。操作时,同时可用全血清样品,不同浓度 (NH4)2SO4盐析样品进行电泳,以资比较。 ⑵ 琼脂双相双扩散鉴定:预先准备该IgG免疫异种动物所获的抗IgG血清。将IgG与抗 IgG...
免疫球蛋白(Immunoglobulin Ig)的含量代表着机体体液免疫的水平,并进一步代表着B细胞的功能,因此测定血清Ig含量可以推知机体的体液免疫功能和诊断某些疾病引起的Ig的过高和过低。 随着免疫学的发展和需要,免疫球蛋白的纯化和其成分的提纯成为必不可少的...
10ml 三去污裂解液配方如下: 50 mmol/L Tris-cl (pH 8.0): 0.07882g 150 mmol/L NaCl: 0.08775g 0.2 g/L叠氮钠: 0.002g 1 g/LSDS 0.01g 100 mg/L Aprotin 0.001g 10 g/L NP-40 0.1g 5 g/L去氧胆酸钠 0.05g 100 mg/L 苯甲基磺酰氟(PMSF) 0.001g 总蛋白抽提...
[原理] 胰蛋白酶与另外两种蛋白水解酶:糜蛋白酶(胰凝乳蛋白酶)和弹性蛋白酶同时存在于胰脏中。由于胰蛋白酶、糜蛋白酶和弹性蛋白酶的酶蛋白分子在结构上及其它很多性质上的相似之处,往往在一般的制备过程中很难将它们彼此彻底分开,传统的分离、纯化技...