1. 取RNA 2. 将电泳槽和板，梳齿浸泡在3%H2O2中20-30分钟，并吹干 3. 跑 1%琼脂糖凝胶，检测样本RNA含量 4. 变性胶 在桌面上利用保险膜铺出一块干净的区域，将1.95g 琼脂糖加入 110ml 的 DEPC-H2O （加热前可在三角瓶上做一个记号，在加热后把蒸发的水分补足...
7.探针的制备 1.在1.5ml离心管中配制以下反应液： 模板DNA(25 ng) 1ul Random Primer 2ul 灭菌水 11ul 总体积：14ul 2.95C加热3分钟后，迅速放置于冰冷却5min。 3.在离心管中按下列顺序加入以下溶液： 10Buffer 2.5ul dNTP Mixture 2.5ul 111 TBq/mmol[a-32P]...
[仪器、试剂、材料] （一）仪器 恒温水浴箱，电泳仪，凝胶成像系统，真空转移仪，真空泵，UV 交联仪，杂交炉，恒温摇床，脱色摇床，漩涡振荡器，分光光度计，微量移液器，电炉（或微波炉），离心管，烧杯，量筒，三角瓶，等。 （二）材料 总RNA样品或mRNA样品...
1） 纯化的RNA的点杂交和狭线杂交 安装印迹装置 1．切一张合适大小的带正电荷尼龙膜。用铅笔标上表示方向的记号。用水把膜简单弄湿，在20SSC中室温泡1 h。 2．在膜浸泡期间，先用0.1 mol/L NaOH小心清洗印迹装置，再用无菌水洗干净。 3．把两片厚滤纸用20SSC...
Northern印迹的制备 预备： 1.按下述步骤，每泳道加10～20g总RNA或 0.5～1gpoly(A)+RNA进行甲醛/ 琼脂糖凝胶电泳，将凝胶放在紫外线透照仪上，旁边置一标尺进行拍照。 a. 总RNA（10～20g）用下列溶液在65℃温育5min： 总RNA（10～20g） 6.0l 甲酰胺 12.5l 10...
【操作】 1．RNA的提取见前。 2．变性胶的制备：取琼脂糖0.2g，加入 DEPC H2O 12.4ml，加热熔化，冷却至 60℃时加入5甲醛凝胶电泳缓冲溶液4.0 、37%甲醛3.6ml、混匀、制胶。待胶凝固后，置于1甲醛凝胶电泳缓冲溶液中预电泳5min。 3．样品制备 取总RNA4.5 ，加...
(4) 将1 ~ 2 l RNA 上样缓冲液加到乙二醛化的RNA 样品中，然后马上把RNA样品加到凝胶加样孔中，留着两边最外面的两个孔不要加样。将RNA 相对分子质量标准参照物加到最外面的孔中。 (5) 以5V/cm 的电压进行电泳，直到溴酚蓝迁移大约8 cm。 (6) 将凝胶放在保鲜...
一．原理 Northern 杂交是用来测量真核生物RNA的量和大小估计其丰度的实验方法，可以从大量的RNA样本同时获得这些信息。其基本步骤包括： 1. 完整mRNA的分离 2. 根据RNA的大小通过琼脂糖凝胶电泳对RNA进行分离 3. 将RNA 转移到固相支持物上，在转移的过程中，...
（一）Southern Blot 原理： 将待检测的DNA分子用/不用限制性内切酶消化后，通过琼脂糖凝胶电泳进行分离，继而将其变性并按其在凝胶中的位置转移到硝酸纤维素薄膜或尼龙膜上，固定后再与同位素或其它标记物标记的DNA或RNA探针进行反应。如果待检物中含有与探...
E.杂交 建议杂交条件：探针浓度50~100ng/ml，温度68℃过夜。 1.将印迹膜置于装有预杂交液的杂交袋中（每100cm2膜20ml预杂交液），封好杂交袋，在设定的杂交温度下预杂交至少1小时。 2.将探针在沸水浴中变性10min.(探针一经变性，立即使用)，用预杂交液稀释成...