【实验原理】 Western Blot（蛋白质印迹或免疫印迹）技术，以蛋白质为检测对象，探针是抗体，显色用标记的二抗。实验采用聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）将样品蛋白质分离，再转移到固相载体（PVDF尼龙膜或NC膜）上；固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且保持电...
Northern杂合反应的步骤主要包括： （1） 加入核酸探针，使与固定于尼龙膜上的特定RNA 进行杂合反应； （2） 待杂合反应结束后以含盐缓冲液与SDS 洗掉非专一性结合于尼龙膜上的核酸探针。 进行反应时应注意下列几个问题： a. 实验操作过程仍应尽可能避免RNase...
要进行Northern杂合反应前，必须先将RNA自洋菜胶体转移至硝化纤维纸（nitrocellulose membrane） 或尼龙膜 （nylon membrane） 上，这一个过程称为转印 （blotting）。 一般常用的方法包括毛细管转移法 （capillary transfer）、真空转移法 （vacuum transfer...
二、将变性RNA转移至硝酸纤维素滤膜 电泳完毕后，可立即将乙醛酰RNA自琼脂糖凝胶转移至硝酸纤维素滤膜，有以下几种转移方法：毛细管洗脱法、真空转移法和电印迹法。毛细管洗脱法如下所述， 真空转移法和印迹法则按有关仪器生产厂家产品说明书进行。尽管有人认...
一、经乙二醛和二甲基亚砜变性处理后进行的RNA电泳 这一方法原于McMaster和Carmichael（1977）。含有乙二醛－DMSO的凝胶比含有甲醛的凝胶更难于进行电泳，因为前者泳动速率较慢而且需将电泳液时行循环以避免电泳过程中形成过高的H+梯度。尽管上述两种凝胶具有...
人、小鼠和大鼠的多种组织来源的高质量mRNA,经电泳分离后预转于尼龙膜上预制的即用型Northern杂交膜，免去RNA电泳操作过程 可检测范围：0.5-10kb 可重复使用 提供ExpressHybTM快速杂交液样品 可靠的优良品质 从1991年始，公司就向广大的生命科学研究者提供高...
第二天： 将上述物品揭开，将胶正面朝下，膜正面朝上，用铅笔作好标记。 将胶浸泡在EB中1-2分钟，用DEPC H2O清洗，将膜放在滤纸上面，夹好，4度下保存，或者直接进行预杂交。 UV杂交（有助于RNA结合到膜上面）。 五、预杂交和杂交 预杂交和杂交 buffer： 100u...
4、Loading buffer（10ul每个样） 总体积 100ul 200 ul 500ul 10MOPS 10ul 20 ul 50ul 甲醛 16 ul 32 ul 80 ul 甲酰胺 50ul 100 ul 250ul Dye 20 ul 40 ul 100 ul DEPC H 2 O 4 ul 8 ul 20 ul 注： 不加EB 5、样品准备 将样品保持在冰块中。 5ugRNA+ 10ul lo...
一、 总RNA的提取 1、 取组织10-50毫克，剪切成大小在0.5厘米以内的碎片，加入5的RNA later（约2毫升）。样品在37度可保存1天。室温下1周，4度下1个月。 2、 匀浆： 用Rnase Erase spray（ICN）清理匀浆器头部（7mm），用DEPC水和乙醇清洗，将上述样品用镊子...
AtlasTM cDNA表达距阵(Expression Array) 同时对588种/1176种关键基因做全景表达图谱分析 同时对大量已知基因的表达进行大规模高通量(High-htroughput)分析 检测关键基因在细胞关键功能中的角色 只需简单的杂交步骤 就在数年前，核酸矩阵技术只能在资金雄厚的...