在做Northern等杂交实验、构建cDNA文库、获取能够编码真核生物蛋白的基因、获得RNA病毒基因时，会用到RNA提取和RT-PCR技术。 真核生物的基因组是DNA，为什么不直接从DNA PCR得到我们需要的基因呢？因为真核生物的基因含有大量的非编码区，称为内元（intron）...

一、实验目的 掌握植物总RNA提取的原理和方法 二、实验原理 RNA的提取：破坏细胞膜除去蛋白除去DNA除去盐离子。 RNase是一类生物活性极其稳定的酶类，能耐高温、耐酸、耐碱，高压灭菌处理也不能使其完全失活。在提取RNA实验中，要尽量抑制RNase的活性。 DEPC...

[实验原理] RNA是一类极易降解的分子，要得到完整的RNA必须最大限度地抑制提取过程中内源性及外源性核糖核酸酶对RNA的降解。本实验以小麦为材料，采用异硫氰酸胍苯酚氯仿抽提法或CTAB法提取总RNA。异硫氰酸胍是高浓度变性剂，可溶解蛋白质，破坏细胞结构，使...

1、塑料制品、玻璃和金属物品的处理 (a)塑料制品：尽可能使用无菌，一次性塑料制品。已标明RNase-Free 的塑料制品，如没有开封使用过，通常没有必要再次处理。对于国产塑料制品，原则上都必须处理方可使用。处理方法如下： (1)在玻璃烧杯中注入去离子水，加入...

RNase酶非常稳定，是导致RNA降解最主要的物质。它在一些极端的条件可以暂时失活，但限制因素去除后又迅速复性。用常规的高温高压蒸气灭菌方法和蛋白抑制剂不能使所有的RNase完全失活。为了获得高质量的真核细胞mRNA，必须使用RNA酶的抑制剂或采用下述的破碎细...

一、目的 了解核酸的组分，并掌握鉴定核酸组分的方法。 二、原理 酵母核酸中RNA含量较多。RNA可溶于碱性溶液，在 碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀， 由此即得到RNA的粗制品。 核糖核酸含有核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸各组分。加硫酸煮沸...

（1）取3 g样品，加入10% 样品重的多聚聚乙烯吡咯烷酮（PVPP），用液氮研磨成细粉状，将细粉分为每份约3 g，并贮藏于-80℃下。 （2）在50 ml falcon管中加入20 ml提取缓冲液。提取液的组成为0.2 mol/L 脱水四硼酸钠（sodium tetriborate decahydrate）、30 mm...

哺乳动物组织样品RNA的抽提最基本的要素是防止RNA在抽提过程中降解，以及尽可能得到最高的RNA抽提效率。以下介绍我们实验室认为最符合以上两个要素的抽提方法。 一、实验材料： Trizol试剂（Invitrogen公司） 研钵，匀浆器，镊子，铝箔都高温灭菌即可； 二、...

实验目的： 使学生掌握采用Trizol抽提法从动物新鲜组织或细胞制备总RNA的实验技术，以及用紫外分光光度法检测RNA的纯度及定量、用琼脂糖电泳法检测RNA的完整性及质量。 实验原理： Trizol是一种新型的总RNA即用型制备试剂，适用于从各种组织或细胞中快速分离...

1.RNAi：（RNA interference）RNA干扰 一些小的双链RNA可以高效、特异的阻断体内特定基因表达，促使mRNA降解，诱使细胞表现出特定基因缺失的表型，称为RNA干扰（RNA interference，RNAi，也译作RNA干预或者干涉）。它也是体内抵御外在感染的一种重要保护机制...