主要仪器 研钵，恒温水浴，旋涡振荡器，冷冻台式高速离心机， 超低温冰箱，紫外检测仪，电泳仪，电泳槽。 试剂 1．Trizol试剂（购自Invitrogen公司） 2．焦碳酸二乙酯 (DEPC) 3．氯仿（新开封） 4．异丙醇（新开封） 5．无RNase灭菌水：用将高温烘烤的玻璃瓶...
来源于任何细胞的RNA都可以通过反转录酶的作用拷贝成双链DNA并克隆化，获得相应的于特定细胞来源的cDNA文库。因此，RNA制备的意义有两个方面 * 获得特定细胞来源的cDNA文库，克隆目的基因 * 分析基因的表达，阐明基因调控的特性，了解从基因转录产生RNA的结构...
1，用异硫氰酸胍提取 提病毒的详细步骤，可参考（我提过N次做定量PCR都没问题）： 1.取 200ul样品数+阴性对照+阳性对照个1.5ml灭菌eppendorf管 2.加600ul异硫氰酸胍，然后加入对照和样品，再加200ul氯仿，颠倒混匀 3.13000rpm离心15min 4.在第3步离心快结束时...
一、准备 1、 物品：Trizol、氯仿（三氯甲烷）、异丙醇、75%灭酶异醇、冷PBS、1.5ml灭酶EP管、灭酶枪头、一次性手套、EP管架、吸管 2、 打开冷冻离心机4℃预冷 二、操作步骤： 将Trizol、氯仿、冷PBS、EP管、灭酶枪头、一次性手套、EP管架、吸管等物品带入细...
RNA的提取 准备试剂：氯仿，异丙醇，75℅乙醇，无RNase的水或0.5℅SDS(溶液均需用DEPC处理过的水配制) 操作步骤: 1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。 b.单层培养细...
抽提微量RNA的柱子最大可以吸附45ug 的RNA。 为了更好地裂解，细胞数不能大于5105，细胞过多会减低产率和纯度。 准备工作： 1.在 24 ml 96－100％乙醇 中加入 6 ml 去RNA酶的水。 2.在每 1 ml Buffer RLT 中加入10 ml -ME (加入-ME的Buffer RLT可在室温下放置...
一.组织RNA提取 1.最好新鲜组织，这样RNA提取的效果比较好，这是肯定的。 2. 如果不是新鲜的（最好在半年之内，-80℃或者液氮中冻存的）组织，注意不要反复冻融，从冰冻状态拿到0-4℃，注意不要拿到常温，待组织解冻后，用 DEPC泡过的剪刀剪一小块组织，称重...
2.8 小量RNA检测方法的提高 当仅有小量RNA时，RT-PCR尤其具有挑战性。在RNA分离过程中加入的作为载体的糖元有助于增加小量样品的产量。可以在加入Trizol的同时加入无RNase的糖元。糖元是水溶性的，可以同RNA保持在水相中以辅助随后的沉淀。对于小于50mg的组织...
2.3 RT-PCR的引物设计 RT-PCR引物设计和一般PCR引物设计可以遵循同样的原则。细心地进行引物设计是PCR中最重要的一步。理想的引物对只同目的序列两侧的单一序列而非其他序列退火。设计糟糕的引物可能会同扩增其他的非目的序列。设计理想的引物都有以下共同的...
融解RNA一般使用TE。 保存RNA应该尽量低温。为了防止痕量RNase的污染，从富含RNase的样品（如胰脏、肝脏）中分离到的 RNA需要贮存在甲醛中以保存高质量的RNA，对于长期贮存更是如此。从大鼠肝脏中提取的RNA，在水中贮存一个星期就基本降解了，而从大鼠脾脏中...