（一）实验程序 如不谨慎操作，外源性RNA酶可以通过下述途径污染RNA制品： （１）玻璃制品、塑料制品和电泳槽 灭菌的一次性使用的塑料制品基本上无RNA〈, /SPAN〉酶，可以不经预处理直接用于制备和贮存RNA。实验室用的普通玻璃器皿和塑料制品经常有RNA酶法染...
一、mRNA的分离 与rRNA和tRNA不同的是，哺乳动物细胞的绝大部分mRNA在其3端均有一poly(A)尾，因此可以用oligo(dT)－纤维素亲和层析法从大量的细胞RNA中分离mRNA。在构建cDNA文库时， 必须经上述纯化步骤制备mRNA模板。进行Northern杂交或Sl 核酸酶作用图分析...
（二）植物总RNA提取 （1）65C水浴中预热15 mL CTAB提取液。 （2）液氮中研磨2～3 g新鲜或-70C冷冻的材料。 （3）转移样品至有CTAB提取液的离心管中，立即激烈涡旋30s，短时放回 65C水浴中（4～5 min）。 （4）加入等体积的氯仿/异戊醇并涡旋混合，10000 rpm...
幼嫩组织的细胞处于旺盛的分裂阶段，核较大而胞质较少，核酸浓度高，且内含物少、次生代谢产物少，蛋白质及多糖类物质相对较少，在SDS或 CTAB物质存在时，经机械研磨，使细胞破裂并释放出内含物，提取的DNA、RNA的产量高，纯度好。 提取DNA所用的提取液、吸头...
收集细胞，离心5000r/min ，5分钟，弃上清，加入异硫氰酸胍变性液（异硫氰酸胍4mol/L；柠檬酸钠25mmol/L，Sarkosy10.5%,-巯基乙醇0.1mol /L）500ml，混匀，振荡10秒，加2 mol/L醋酸钠50ml，水饱和酚500m l和氯仿/异戊醇（49：1）100m l颠倒混合数秒钟，冰浴15...
mRNA的分离 与rRNA和tRNA不同的是，哺乳动物细胞的绝大部分mRNA在其3端均有一 poly(A)尾，因此可以用oligo(dT)－纤维素亲和层析法从大量的细胞RNA中分离mRNAdmonds等，1971;At Leder，1972）。在构建cDNA文库时， 必须经上述纯化步骤制备mRNA模板。 进行North...
1）检测RNA溶液的吸光度 280、320、230、260nm下的吸光度分别代表了核酸、背景（溶液浑浊度）、盐浓度和蛋白等有机物的值。一般的，我们只看OD260/OD280（Ratio，R）。1.82.0时，我们认为RNA中蛋白或者时其他有机物的污染是可以容忍的，不过要注意，当你用Tr...
异硫氰酸胍酚法提取RNA的原理如下：GIT与－巯基乙醇共同作用抑制RNase的活性；GIT与 十二烷基肌氨酸钠 （Sarcosyl）作用使蛋白质变性，从而释放RNA；酸性条件下DNA极少发生解离，同蛋白质一起变性被离心下来，RNA则溶于上清中。该法所提 RNA纯度高完整性好较...
实验原理： 细胞内大部份RNA均与蛋白质结合在一起，并且多以核蛋白的形式存在。因此，分离制备RNA 时，首先遇到的是必须使RNA与蛋白解离，并除去蛋白质。由于RNA的种类来源和存在形式不同，所用的制备方法各异，一般常用的方法有，盐酸胍法，去污剂法和苯酚法...
1.抽检方式：从每批次生产的成品中抽取1样品进行检验，如该批次生产的产品少于1000盒，抽取一盒作性能检验。 2.检验要求： 2.1 体液病毒DNA／病毒RNA小量制备试剂盒组成：见产品说明书。 2.2组成核酸纯化试剂盒的塑料耗材的要求详见Q／WTJ- J01 00002。 2.3使...