2. 电泳分析
(1) 用50mM NaCl， 1mM EDTA制备1.4%的碱性琼脂糖电泳， 并置碱性电泳缓冲液中30分钟。
(2) 取样品液， 用TE调整体积， 使第一链和第二链产率测定液的体积相同，加入等体积的2×样品缓冲液(20mmol/L NaOH， 20%甘油，0.025%溴粉兰）。
(3) 加样，电泳到染料距前沿线只剩胶长度的1/3处，电泳缓冲液为30mmol/L NaOH， 1mmol/L EDTA。
(4) 将胶浸入7% TCA中，室温放置30分钟(直至染料由蓝色变至黄色)，取出置滤纸上，干燥数小时。
(5) 用保鲜膜包裹干燥的胶，室温压X光片(用增感屏时-70℃压片)。
二、其它cDNA合成技术
除Riboclone M-MLV(H-)cDNA合成技术外，Promega公司还提供有多个AMV合成试剂盒，不同试剂盒所提供的引物或引物一延接头(Primpr- Adaptor)不同，有oligo(dT)15 引物、随机引物、XbaⅠ引物-延接头、NotⅠ引物-延接头等，其余试剂一样，这些系统包括：
20mg 引物
20ml 5×第一链缓冲液， 配方如下：
250mmol/L Tris·Cl，pH8.3(42℃);250mmol/L KCl;50mmol/L
MgCl2; 2.5mmol/L 亚精胺(Spermidine); 50mmol/L DTT;
20mmol/L dATP， dCTP，dGTP，dTTP(各5mmol/L)。
50ml 40mM焦碳酸钠
625m rRNasin RNA酶抑制剂
600m AMV反转录酶
5mg 1.2kb对照RNA
200ml 10×第二链缓冲液，配方如下：
400mmol/L Tris·Cl，pH7.2; 900mmol/L KCl; 30mmol/L
MgCl2; 30mmol/L DTT; 0.5mg/ml BSA。
2m E.Coli RNaseH
500m E.ColiDNA PolymeraseⅠ
100m T4 DNA PolymeraseⅠ
1.5ml 不含核酸酶的水
以上所有试剂除对照RNA需在-70℃保存外，其余均可保存于-20℃，可以合成40mgmRNA。
（一）第一链合成
下面介绍的是25ml体积反应系统，该系统可合成多至2mgmRNA，每增加1mg mRNA，需增加反应体积10ml，如5mg mRNA需55ml反应体积。
引物或引物-延接头和反转录酶与mRNA的比例应分别保持为0.5mg/mg（对NotⅠ引物-延接头为0.3mg/mg）和15m/mg.
1、试剂：
[a-32P]dCTP（>400ci/mmol），EDTA(50mM和200mM)，TE饱和酶/氯仿，7.5mM NH4Ac，100%和70%乙醇，TE缓冲液(10mM Tris·Cl，pH8.0，1mm EDTA)。
2、操作步骤：
（1）取一灭菌的无RNA酶的eppendorf管加入的RNA样品，及引物或引物-延接头，用H2O调节0.5mg引物 /mg mRNA（或0.3mg NotⅠ引物-延接头/mg mRNA）的体积至15ml，70℃加热5分钟，待冷至室温，离心数秒钟使溶液集中在管底，然后依次加入：
5×第一链缓冲液 5ml
rRNasinR RNA酶抑制剂 25ml
40mM焦碳酸钠2.5ml
AMV反转录酶 15m/mg RNA
加无水RNA酶水至总体积25ml
在加入焦碳酸钠和AMV反转录酶前，需将反应液42℃温浴5分钟，以阻止焦碳酸钠沉淀。焦碳酸钠主要用于抑止第一链形成发夹结构。
（2）轻弹eppendorf管，取出5ml至另一加于2-5m[a-32P]dCTP c>400ci/mmol）（其体积不能超过1ml），用以第一链同位素掺入放射性活性测定。
（3）42℃温浴1小时。
（4）取出置冰上。
（5）掺入测定的eppendorf管加入50mM EDTA，终止反应，并使总体积为100ml。可取90ml进行电泳分析，另10ml进行同位素掺入测定。
（6）第一链合成离心管可直接用于第二链合成。
（二）第二链合成
第二链合成可在第一链合成反应液中直接进行。