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细菌的人工培养方法(2)

作者:中华医学网发布时间:2017-10-14 15:41浏览:

4、血液琼脂培养基:
(1)将制好的普通琼脂培养基高压灭菌后。
(2)待冷至56℃左右时,加入5%~10%脱纤维的无菌的绵羊的血液(也可用家兔血和人血),混匀(注意勿产生气泡),分别倒人灭菌试管或平皿中,即制成血琼脂斜面或血液琼脂平板。置4℃冰箱备用,血液琼脂平板是咽拭子最常用的培养基。
5、蛋白胨水培养基:
取100ml蒸馏水,加入蛋白胨1克和氯化钠0.5克,加热溶解,待冷却后,调整pH为7.6,分装于试管或三角烧瓶中,15磅灭菌15~30分钟,待冷,置4℃冰箱中保存。蛋白胨水培养基常用于制备单糖发酵管或用于检查细菌的吲哚试验等。
(二)细菌培养基的接种方法
1、分离培养法(平板划线法)
(1)分区划线:
①右手持接种环在酒精灯火焰上烧灼灭菌,待冷(稍待约5~10秒钟),取细菌培养物(或病人材料)少许。
②左手持琼脂平板底部拇指稍顶开平皿盖(接种环能进入方便操作即可),并靠近酒精灯火焰(火焰周围直径10cm左右范围空气中细菌含量少)附近操作,以免空气中杂菌落入。右手握持沾菌的接种环在琼脂平板边缘上端来回划线涂成菌膜,菌膜占总面积的1/10,划线时接种环的面与平板面成45度角轻轻接触,以手腕的力在平皿表面做轻轻的滑动,划线要求密集平行,充分利用平板表面。
③烧灼接种环,杀灭环上残留的细菌,待接种环冷却后将接种环通过菌膜处作连续划线,以占平皿面积的1/5,为一区划线。
④左手旋转平皿90度左右,烧灼接种环,杀灭环上残留的细菌,待接种环冷却后,继续用接种环通过一区2~3次连续划线占平皿面积的另1/5,为第二区划线。
⑤如此重复操作3~5次。
将培养皿放置37℃温箱内,翻转培养(即皿底在上,盖在下)。经37℃,24小时培养后取出,观察琼脂平板表面生长的各种菌落,注意其大小、形状、边缘、表面、透明度、颜色等性状。在血琼脂平板上,尚可观察菌落四周有无溶血现象。
(2)连续划线法:
这种方法主要适应于熟练技术人员。以无菌操作取标本涂抹于平板边缘的上端成菌膜,占平板面积的1/10,酒精灯火焰上烧灼接种环法灭菌,待冷却后重复涂抹菌膜一部分,再向下连续划线至平板底部,经37℃培养18~24小时后观察生长情况。
2、斜面培养基接种方法
①左手的拇指、食指、中指、无名指分别持握菌种管与接种管,将两管并列,略倾斜斜面部均向上,右手分别转动两管棉塞,以便接种时易于拔取。②右手执持接种环(姿势与握铅笔相似),接种环和环柄的金属部分酒精灯烧灼灭菌,。③以右手手掌与小指、小指与无名指分别拔取并夹持两管棉塞,将两管管口迅速通过酒精灯火焰灭菌。④将灭菌并已冷却的接种环伸入菌种管中,从斜面上刮取菌苔少许,退出菌种管,再伸进待接种的培养基管,自斜面底部轻轻向上划一条直线,再次深入底部在琼脂表面轻轻的蛇形划线。沾菌的接种环,进出试管时,均不应触及试管内壁。⑤接种完毕,接种环酒精等火焰灭菌,将两管管口迅速通过酒精灯火焰2~3次灭菌,塞回棉塞,标记培养管。经37℃孵育18~24小时后观察生长情况。
3、液体培养基接种法
①握持菌种管及待接种即肉汤管的方法同斜面培养基接种法。②接种环灭菌冷却后,伸入菌种管刮取少量菌苔退出菌种管,再伸人肉汤管,在接近液面的管壁上轻轻研磨,并蘸取少许肉汤调和,使菌混合于肉汤中。③接种完毕,接种环酒精等火焰灭菌,试管口灭菌后加塞,标记培养管。经37℃培养18~24小时后观察生长情况。