动物肝脏RNA的制备(苯酚法)和纯度测定-2

试剂和器材
试剂
1.DNA标准溶液(须经定磷确定其纯度)：取小牛胸腺DNA钠盐以0.01mol/L氢氯化钠溶液配成200 µg/mL的溶液。
2.样品待测液：准确称取DNA干燥制品以0.01mol/L氢氯化钠溶液配成100 µg/mL左右的溶液。在测定RNA制品中的DNA含量时，要求RNA制品的每mL待测液中至少含有20µg DNA，才能进行测定。
3.二苯胺试剂：使用前称取1g重结晶二苯胺，溶于100mL分析纯的冰乙酸中，再加入10mL过氯酸（60%以上），混匀待用。临用前加入1mL1.6%乙醛溶液。所配得试剂应为无色。
器材
1.分析天平 2.恒温水浴 3.试管 4.吸量管（2mL和5mL） 5.分光光度计

[附3]地衣酚显色法测定RNA含量

原理
核糖核酸与浓盐酸共热时，即发生降解，形成的核糖继而转变为糠醛，后者与3，5-二羟基甲苯（地衣酚）反应呈鲜绿色，该反应需用三氯化铁或氯化铜作催化剂，反应产物在670nm处有最大吸收。RNA在20～250µ g范围内，光吸收与RNA的浓度成正比。地衣酚反应特异性较差，凡戊糖均有此反应，DNA和其他杂质也能给出类似的颜色。因此测定RNA时可先测定DNA含量，再计算出RNA含量 。

操作方法
一、RNA标准曲线的制定
取10支试管，分成2组，依次加入0.5、1.0、1.5、2.0和2.5mLRNA标准溶液。分别加入蒸馏水使最终体积为2.5mL。另取2支试管，各加入2.5mL水作为对照。然后各加入2.5mL地衣酚试剂。混匀后，于沸水浴内加热20分钟。取出冷却（自来水中）。于670nm波长处测定光吸收值。取两管平均值，以RNA浓度为横坐标，光吸收值为纵坐标作图，绘制标准曲线。
二、制品的测定
取2支试管，各加入2.5mL待测液，（样品量应在标准曲线的可测范围之内），再加2.5mL地衣酚试剂。如前所述进行测定。
三、RNA含量的计算
根据测得的光吸收值，从标准曲线上查出相当该光吸收值的RNA含量。按下式计算出制品中RNA的百分含量：

试剂和器材
试剂
1.RNA标准溶液（须经定磷确定其纯度）：取酵母RNA配成200 g/mL的溶液。
2.样品待测液：准确稀释，使每mL溶液含RNA干燥制品50-100 g。
3.地衣酚试剂：先配制0.1%三氯化铁的浓盐酸（分析纯）溶液，实验前用此溶液作为溶剂配成0.1%地衣酚溶液。
器材
1.分析天平 2.沸水浴 3.试管 4.吸量管 5.分光光度计