作者：中华医学网发布时间：2017-10-13 16:12浏览：
次
|
原理 琼脂糖凝胶电泳是重组DNA研究中常用的技术，可用于分离，鉴定和纯化DNA片段。不同大小、不同形状和不同构象的DNA分子在相同的电泳条件下(如凝胶浓度、电流、电压、缓冲液等)，有不同的迁移率，所以可通过电泳使其分离。凝胶中的DNA可与荧光染料溴化乙锭(EB)结合，在紫外灯下可看到荧光条带，籍此可分析实验结果。 仪器与器材 1. 电泳仪 2. 水平式核酸电泳槽 3. 紫外灯 试剂与材料： 1. 琼脂糖 2. 6×点样缓冲液：0.25%溴酚兰、40%蔗糖 3. DNA分子量标准：λDNA分子量标准：λDNA/HindⅢ 4. 50×TAE电泳缓冲液贮存液配方：(50×)每升 242g Tris 57.1ml 冰醋酸 100ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 1×缓冲液浓度：0.04mol/L Tris HAc、0.002mol/L EDTA 5. 0.8%琼脂糖：0.8g琼脂糖用100ml 1×TAE沸水浴溶解 6. 10mg/ml EB 1.0g 溴乙锭 100ml 三蒸水 操作步骤： 1. 将凝胶成形模具两端用医用胶布封好，水平放置，将选好的梳子放好，梳子底部与模具之间留1mm空间。 2. 称取DNA电泳用琼脂糖0.8g放入250ml的三角烧瓶中，加入100ml 1×TAE缓冲液，混匀后，将烧瓶置于电炉上，加热煮沸，直至琼脂糖完全溶解。 3. 关闭电炉，取下三角烧瓶，将其置室温下冷却至70℃左右(手握烧瓶可以耐受)，再加入溴化乙锭(10mg/ml)5μl，混匀后，即将凝胶溶液倒入胶板铺板。本实验所用制胶板约需胶液100ml。 4. 室温下待凝胶完全凝固，需时约30分钟，揭去二端胶布，拔出梳齿，将胶板放入电泳槽中。 5. 在电泳槽加入1×TAE缓冲液，以高出凝胶表面2mm为宜。 6. 取Ep管三支，标号，如下表所示准备电泳样品。
|