一、原理
DNA多态性是指DNA碱基顺序的差异性。这种差异性不仅存在于不同的植物之间，也存在于同一种植物的不同个体之间。RFLP多态性是指DNA限制性内切酶酶切片段长度的多态性(restniction fragment length olymophorphism)。由于碱基顺序的差异，在不同的种或同一个种的不同个体之间，它们的基因组DNA限制性内切酶位点的种类和数目不同，经特定的限制性内切酶切割后，所产生的限制性酶切片段在大小（长度）和数目方面自然也存在着差异。通过琼脂糖凝胶电泳分离和溴化乙锭染色，在紫外检测仪下观察，即可直接看到这种差异。电泳分离后，通过Southern杂交也可显示出已知DNA片段的差异。
二、目的
通过本实验了解不同植物或同一植物不同个体之间基因组DNA顺序的差异性，掌握DNA限制性酶切片段长度多态性研究的基本方法。
三、材料和试剂
1、从不同植物或同一植物不同个体分离出的基因组DNA。
2、限制性内切酶。
3、10×限制性内切酶缓冲液。
4、0.5M EDTA(pH 8.0)
5、溴化乙锭。
6、琼脂糖。
7、电泳仪和电泳槽。
四、操作步骤
（一）限制性内切酶酶切。
1、将在-20℃冷冻的DNA在冰上融化。
2、取8支微量离心管按下表所示作好标记
，并依次加入所需成分。
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品种I |
品种II |
品种I－1 |
品种II－2 |
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单酶切 1# |
双酶切 2# |
单酶切 3# |
双酶切 4# |
单酶切 5# |
双酶切 6# |
单酶切 7# |
双酶切 8# |
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DNA |
10 |
10 |
10 |
10 |
10 |
10 |
10 |
10 |
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10×缓冲液 |
2 |
2 |
2 |
2 |
2 |
2 |
2 |
2 |
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Eco R I |
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1 |
1 |
1 |
1 |
1 |
1 |
1 |
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Hind III |
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1 |
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1 |
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1 |
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1 |
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无菌水 |
7 |
6 |
7 |
6 |
7 |
6 |
7 |
6 |
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总体积(ul) |
20 |
20 |
20 |
20 |
20 |
20 |
20 |
20 |
3、混匀，慢速离心2秒，使溶液全部聚于管底。
4、37℃保温2－3小时。
5、加入1／10体积的0.5M EDTA溶液终止反应。
（二）琼脂糖凝胶电泳分析