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电泳带型分析

作者:中华医学网发布时间:2017-10-13 09:54浏览:

DNA电泳需要进行带型分析,在实验过程中常会发现所得的带型出现在这样那样的问题。在此,我们对DNA带型做了相应的分析。

 

带型
原因分析
解决办法
弱带或无带
上样的DNA量不够
增加DNA的上样量,聚丙烯酰胺凝胶电泳比 琼脂糖电泳灵敏度稍高
DNA降解
避免DNA的 核酸酶污染
电泳时间过长,DNA跑出
减短电泳时间,降低电压,增强凝胶浓度
EB染色的DNA,紫外光源不合适
应用短波长(254nm),增强紫外灯灵敏度
DNA带缺失
小DNA带走出凝胶
减短电泳时间,降低电压,增强凝胶浓度
分子大小相近的DNA带不易分辨
增加电泳时间,核准正确的凝胶浓度
DNA 变性
电泳前请勿高温加热DNA链,以20mM NaCl Buffer稀释DNA
巨大DNA链,凝胶电泳不合适
在脉冲凝胶电泳上分析
DNA带模糊
DNA降解
避免 核酸酶污染
DNA上样量过多
减少凝胶中DNA上样量
所用电泳条件不合适
电泳时电压不应超过20V/cm,温度<30℃,巨大DNA链,温度应<15℃,核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力
DNA样含盐过高
电泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐
有蛋白污染
电泳前酚抽提去除蛋白
DNA变性
电泳前勿加热,用20mM NaCl缓冲液稀释DNA
不规则DNA带迁移
对于λ/Hind III片段COS位点复性
电泳前加热DNA 65℃加热5-10分钟,然后在冰上冷却5分钟
电泳条件不合适
电泳电压不超过20V/cm,温度<30℃,电泳缓冲液有足够的缓冲能力
DNA变性
以20mM NaCl Buffer稀释DNA,电泳前勿加热