绵羊红细胞（SRBC），与相应抗体（溶血素）结合后，可激活待检血清中的补体而导致SRBC溶血。其溶血程度与血清中补体的含量和功能有关。由于补体含量与溶血程度之间呈正相关，但不是直线关系，而呈S曲线关系，故通常取反应曲线中间部位即50％溶血（CH50）为判定终点。由于抗原抗体复合物激活的是补体的经典途径，C1～9任何一种成分缺陷都可使CH50降低，所以此实验反映了总补体的活性。
材料
磷酸缓冲盐水(pH7.4 PBS)、2%绵羊红细胞、溶血素（2单位）、待检血清、小试管、吸管、37℃水浴箱等。
方法
1、标准曲线的制备
(1)2%血红素溶液配制 吸取5m1 2%绵羊红细胞悬液加入离心管中，2000rpm离心5分钟，去除上清，加蒸馏水2.5m1，待羊红细胞溶解后，再加1.7%NaCl溶液2.5m1，混匀，即为2%血红素溶液；
(2)取小试管11支，按表1分别加入各成分；
(3)混匀后2000rpm离心5分钟，取上清用分光光度计(波长540nm)测光密度值；
(4)以光密度值为纵坐标，溶血%为横坐标，绘出标准曲线。
2、待检血清测定
（1） 取病人血清0.1ml，加PBS 3.9ml，使成1:40稀释，混匀后分装4个小试管，每管1ml；
（2） 加2单位溶血素，每管lml；
（3） 加2%绵羊红细胞，每管lml；
（4） 37℃水浴30分钟；
（5） 2000rpm离心5分钟；
（6） 取上清液测光密度值（540nm波长）。
表1 CH50测定的标准曲线制备
|
试管号 |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
10 |
11 |
|
2%血红素（ml） |
—— |
0.1 |
0.2 |
0.3 |
0.4 |
0.5 |
0.6 |
0.7 |
0.8 |
0.9 |
1.0 |
|
2%SRBC（ml） |
1.0 |
0.9 |
0.8 |
0.7 |
0.6 |
0.5 |
0.4 |
0.3 |
0.2 |
0.1 |
—— |
|
PBS（ml） |
2.0 |
2.0 |
2.0 |
2.0 |
2.0 |
2.0 |
2.0 |
2.0 |
2.0 |
2.0 |
2.0 |
|
溶血% |
0 |
10 |
20 |
30 |
40 |
50 |
60 |
70 |
80 |
90 |
100 |
结果
按下法计算每ml待检血清中的补体含量 (计算4管的平均值)。
例: 病人血清稀释度1:40，测得光密度值为0.48 (平均值)，自标准曲线查出溶血%为60，则: 40:X = 50:60；X=40×60&pide;50=48(单位/ml）。
此结果主要反映通过经典途径活化的总补体的活性