十六、各位老师，有几个关于多聚赖氨酸包被培养板的问题请教
1、pll到底溶于硼酸缓冲液还是溶于三蒸水或双蒸水
2、使用前是用灭菌的去离子水稀释吗，可不可以用双蒸水或别的
答：多聚赖氨酸溶于硼酸缓冲液或者无菌培养用水；
多聚赖氨酸包被培养板使用前是用灭菌的去离子水稀释，最好不要用双蒸水或别的，因为多聚赖氨酸包被的原理是通过改变器皿表面的电荷而促进细胞的黏附。
十七、请问：多聚赖氨酸包被培养板和培养瓶时，该注意什么问题？
答：我的方法是：浓度为50ng/1ml的多聚赖氨酸，加入培养板或培养瓶能均匀覆盖底部就可，放置在无菌操作台中过夜。第二天早上用时先用双蒸水冲洗三遍再用。
十八、我的问题是多聚赖氨酸可以在培养瓶中放多长时间，太长了会有影响吗？
答：我曾用过多聚赖氨酸包被培养瓶,但浓度是0.1mg/ml,我都是放一夜,第二天吸掉晾干就用,当然要紫外消一下.我觉得时间长点没什么大碍。
我们这里的老师说，多聚赖氨酸不能用紫外线照射。
1.用赖氨酸包被培养板和培养瓶时，应该选用多聚左旋赖氨酸(分子量为15-30万) ；
2.感觉你“浓度为50ng/1ml”有些低，我一般最后多聚赖氨酸使用浓度达到20－30ug/ml；
3.包被时间一般为6－7h，或者过夜也可；
4.使用时应该先用灭菌水洗三次＋PBS（起平衡盐作用）洗一次，洗液的量应该大于包被液的量；
5.“多聚赖氨酸可以在培养瓶中放多长时间，太长了会有影响吗？”，我包被时间最长的经历 有过48h,最后只是多聚赖氨酸随着时间延长蒸发一些而量变少了，但是对细胞生长并无大碍，这是我曾经有过的经历，所以我会负责地告诉你；
6.“多聚赖氨酸能在4度冰箱里放多久？”，最好置于－20度保存，放置数月乃至半年都可以。
我问过博士德公司，他们分装的多聚赖氨酸是用来作免疫组化的，没有做过细胞培养实验，他们不保证能否用在细胞培养中，建议你买其他公司的吧，有固体的，分子量为15-30万，我们实验室用浓度0.01%的来促进神经细胞贴壁。
我们用的多聚赖氨酸浓度为100ug/ml,一般包被3-4小时即可用.我们包被完后一般放在培养箱里,临用时拿出来洗三次，吹干即可．如果不急着用，放在培养箱里较长时间也没关系，把瓶盖拧紧即可，我最长放了２星期也没有问题。
左旋和右旋的多聚赖氨酸都可以用于包被细胞培养器具,主要看你的细胞贴壁能力如何,左旋的更利于细胞贴壁.我们一般使用0.01%浓度的,包被过夜,第二天用双蒸水洗两三次,超净台紫外照射,风干。可以直接买sigma的原装粉剂自己配。还有,配好的多聚赖氨酸在4度时间不能放置太久,大概就一两周吧。存放于-20度中的一般为0.1%的,而且不能反复冻融,只能融化一次。最好是配好后分装。
十九、多聚赖氨酸可用蒸馏水或PBS配制吗？
答：可以的，我们这儿基本上都是用去离子水配制的，这几种方法效果差不多。不知道你是用来做什么的，免疫组化还是养细胞？ihc没什么特别说明，如果是包被瓶皿，那就要注意无菌操作，还有有些普通的多聚赖氨酸加有防腐剂，对细胞有影响的！！ （注：sigma公司的产品有注明：used to coat tissue culture surfaces。购买时要注意）
如果是浸泡材料后直接接种细胞的话（多聚赖氨酸有利于细胞帖壁），我建议你用PBS,因为PBS平衡盐，对细胞损伤小。如果配制后是用来加入培养基的（只是作为其中的一种成份），可以用三蒸水。
说明书上要求配制及存放要在塑料制品中，忌玻璃制品，用PBS稀释
二十、是否需要一次性滤器滤过一下,用前照一小时？
答：我觉得要是用一次性滤器滤过的东西，就不用再照了。没必要。
二十一、用多聚赖氨酸包被可以减少细胞脱片，根据细胞类型而定，最好用之。以下是我作细胞爬片时步骤：
（1）多聚赖氨酸（PLL）：武汉博士德分装Sigma产品，10ml/瓶。4度存放，有效期1年。
博士德说明书明确指出：多聚赖氨酸一般用干净的塑料器皿，如塑料切片盒，塑料杯等稀释，而不能用玻璃器皿稀释，以免影响效果；在1:10稀释液可以保存在4度里，三个月内仍然可以使用。
因为多聚赖氨酸对细胞有一定毒性，所以在保证贴附的前提下，尽量使用低点儿的浓度。
（2）无菌处理：PLL不可以高温消毒，故应过滤除均，分装于无菌处理的细胞冻存管内，1ml/管，封口模密封，4度保存。另外，准备无菌去离子水 50ml。
（3）配置工作液：用移液枪吸取0.3ml PLL＋3ml 无菌去离子水，混匀放于10ml无菌塑料离心管中。封口模密封后4度存放。
（4）玻片处理：常规处理的盖玻片，纱布“夹心饼式”消毒、保存。铺片于培养皿中，移液枪将PLL工作液“滴加于”玻片上，室温10分钟后，用消毒好的纱布条吸取玻片上的PLL液。在超静台内风干后使用，或者超静台内过夜晾干，次日使用。
（5）常规细胞消化，离心后爬片。
如果既然细胞生长状态良好，染色时不掉片，可以不用PLL。有些细胞，如神经元就必须要PLL包，要不细胞生长受影响，也会掉片。
二十二、制备多聚赖氨酸盖玻片方法一
用超纯水配成母液浓度为1mg/ml的多聚赖氨酸（Poly-L-Lysine），分装好以后-20度保存，用的时后再冻融。
方法：
1.吸取约0.25ml滴在无菌的盖玻片上过夜，使多聚赖氨酸粘附在盖玻片上。
2.第二天吸去多余的多聚赖氨酸溶液，把盖玻片依次经去离子水、Tyrode溶液和去离子水浸洗两次。
3.空气干噪并用紫外灯照射15分钟后即可使用（不要求无菌的话操作可简单一些）。
二十三、制备多聚赖氨酸盖玻片方法二
自来水浸2h，浸酸过夜，自来水冲洗干净，95%乙醇浸12h,70度烤干，高压处理，涂一层多聚赖氨酸（0.025mg/ml），室温包被 4h，DD水冲洗10遍，无水乙醇冲洗，超净台风干。盖玻片易碎，处理时动作要轻，还有一次多处理一点，备用。
1.多聚赖氨酸不能高压灭菌，本身就是氨基酸，高压会破坏它的成分。
2.多聚赖氨酸可以紫外照射，包括国外的文献，都说过用之前用紫外照射。
3.做之前要先把游离的多聚赖氨酸洗去。
综观上述，有个别细节问题大家的建议好像不太统一或者我没有找到答案：
1.能否紫外照射铺好多聚赖氨酸的板子？
有朋友提到：不能。
其他很多朋友提到除过滤外使用紫外灭菌。
2.配好的存储液能否反复冻融？
有朋友提到：“多聚赖氨酸在水溶液中易分解，所以一次不要配太多工作液。”
朋友提到：不能反复冻融。
没有看到明确说反复冻融无影响的