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细胞培养板的选择和使用问题与解决方法-3

作者:中华医学网发布时间:2017-10-12 09:18浏览:

问:看到很多讨论说 96孔四周不做数据处理,那么还是要加细胞或培养基吗?如果我把四周设为空白孔(不加细胞)作为阴性对照,可以用来调零或计算抑制率不?
答:可用只加培养基组作为正常对照组,来计算细胞生存率=给药组MTT/正常组MTT×100%,余空可不加任何物质。  MTT不同与做 ELISA需要设立空白对照、阴性对照和阳性对照,这其中的空白对照一般用PBS,目的是去除板底效应。
实际上,对于96孔板的细胞培养可以采取一个方法来改变出现误差的情况,就是将你的分组打乱,不要让你同一组的细胞集中排在一个区域,尽量打乱,就可以了
首先,分析原因,即必须知道在96孔板四周做数据处理会有什么影响。
因为96孔板的密封性比较良好,也就是说培养箱内空气中的O2是透过板四周很小的空隙进入培养板的,细胞代谢产生的CO2也是通过四周空隙从板内排出来的。在板内外气体交换时,37度条件下,板内的水汽也被大量带出板外。这样,就会造成96孔四周孔内的体积减少,如果细心一点,就会发现外外周孔内培养基的体积明显小于内部的体积。因此,如果最外一周有细胞进行培养,则会因培养基成分的浓度偏高而对细胞有影响,同时也会因为体积变化在做加入药物干预实验时,药物浓度偏高而对测定结果有影响。
因此,在具体操作时,可以采用以下对策:
知道原因,我们可以跟据实验情况选择PBS或D-Hanks溶液,因为外周加入这种成本低廉的溶液,一方面可以减少内部各孔中细胞培养液中水份的损失,另一方面,可以做为分析染菌等突发事故的原因,进行排查,找到染菌源头。当然,因为作MTT时,你本身会做空白对照与阳性对照,所以你可以完全不用管本底带来的误差了(建议你采用中间列6个孔为空白对照组,剩下共有9组54个孔,正好可以做三个药,每个药可设高、中、低三个浓度;加细胞时,你采用随机加细胞法,反正60孔细胞你加满就可以放心去培养了!)。
2.细胞培养板与ELISA
问:请教各位,做ELISA能否用培养板呢,有什么差别呢?
答:应该用ELISA试验专用板子。细胞培养板是不行的。ELISA专用板条,是经过处理的,要求每孔的均一性要好;而细胞培养板同样经过处理,但是是为了细胞更好地贴壁生长,使用细胞培养板可能会造成孔与孔之间的显色没有可比性。
所以,细胞培养板可以做要求不严格的定性ELISA实验,而其他情况,应当使用正规ELISA板条。
问:大家的ELisa板有没有重复利用啊,我们这里重复利用,但是没有洗板机,就人工洗一下,然后煮沸,再烘干,不知这样是否合理啊,我感觉还是新板的效果好些,还请高手指教!
答:细胞培养板用于定性或要求不是很高还可以,对于定量试剂最好用酶标板,可以提高均一性减少差异,而且强吸附酶标板还可以减少包被抗原或抗体的用量,因此最好用酶标板。
ELisa板一般不能重复利用。一是对板子均匀性的要求高,重复使用难达到。二是不划算,一块板子的试剂便宜的要几百元,贵的要几千元,而一块空板贵的也就几十元,便宜的还不到10元,再将样本的价格和耗费的时间加上,而得到不靠的结果,你说应该如何办?
洗板机不是清洗重复使用板子的,而是在加样过程中为了提高自动化程度洗板子用的(洗涤是ELISA实验步骤之一)。
3.细胞培养板与免疫组化
问:在塑料的细胞培养板上,进行免疫组化应当怎样合适,有没有这样的技巧?
答:完全没有什么特别的,只是在最后封片的时候,有些不同。还有需要注意的是每一步加液体时应从培养孔的壁上轻轻加上。使液体慢慢到达孔底,我第一次作时,没注意到这一点,到最后细胞所剩无几,所以虽是细节问题,但很重要 。