【材料】
１?试剂：吖啶橙贮存液（10mg吖啶橙溶解于100mLPBS中，过滤，4℃避光保存），0.01mol/L、Ph6.8PBS。
２?器材：吸管，试管，玻片，荧光显微镜。
【方法】
１?制备待检活细胞悬液，浓度约为1×10７/mL。
２?取95uL的细胞悬液，加5uL的吖啶橙贮存液混匀。
３?吸一滴混合液，点于洁净玻片上，直接用盖玻片封片。
４?荧光显微镜观察或避光保存于4℃，待观察。
【结果】
在荧光显微镜下，细胞核DNA为黄色或黄绿色均匀荧光，细胞质和核仁的RNA为桔黄色或桔红色荧光。出现细胞凋亡时，细胞核或细胞质内可见致密浓染的黄绿色染色，甚或见黄绿色碎片。细胞坏死时，细胞质内黄绿色或桔黄色荧光均可减弱或消失。
（2）琼脂糖凝胶电泳法
【原理及意义】
培养或单细胞悬液用细胞裂解液消化细胞按常规法提取DNA后，置于含溴化乙啶的1.5%琼脂糖凝胶中进行电泳，细胞出现PCD时呈典型的“梯状”条带，而坏死时，呈模糊的弥散膜状条带。
【材料】
１?试剂：缓冲液，细胞裂解液，Rnase（10mg/mL溶于TE缓冲液中），醋酸钠，乙醇，苯酚和氯仿。
２?器材：电泳槽，电泳仪。
【方法】
１?约10６细胞洗脱后，1000ｒ/min离心5min，去上清。
２?用4mL的PBS重悬洗后，同法离心去上清。
３?置液氮中骤冷，5min（无条件可省略）。
４?加0.5～1mL细胞裂解液重悬细胞，50℃，过夜，不时振摇。
５?加等体积酚和氯仿、异戊醇各抽提1次（充分混匀，5000ｇ，5min）。
６?取上清加入1/10体积的3mol/L醋酸钠和2.5倍体积的无水乙醇，混匀。
７?液氮10min，1000ｇ，5min离心沉淀DNA，70%乙醇洗１次后，真空抽干，溶入500uLTE缓冲液中。
８?加入25uL Rnase，37℃水浴，30min。
９?取所制备的样品1.5%琼脂糖凝胶电泳，观察。
【结果判断】
细胞出现程序化细胞死亡时，在琼脂糖凝胶电泳带上呈现有一定间隔的梯状条带，而细胞坏死时则呈模糊的片状条带（无间隔），阴性对照者仅在近电泳点样处出现基因组条带。
（3）流式细胞仪观察－PI染色法
【原理及意义】
细胞凋亡时，流式细胞检测可呈现亚二倍体核型峰的特征。此外，根据细胞光散射特
点，应用碘化丙啶（PI）染色可使之与坏死相区别。在ＤＮＡ直方图上，凋亡细胞出现亚二倍体峰，表现为二倍体峰（Ｇ１细胞）的减少，在Ｇ１峰左侧出现亚二倍体细胞群的峰型。而坏死时，细胞周期中的细胞均出现不同程度的减少，亚二倍体细胞量多少不等。在光散射图谱上，前向光散射与细胞大小有关，细胞凋亡时常表现为细胞皱缩，故前向光散射低于正常。细胞坏死时，常表现为细胞肿胀，故前向光散射高于正常。侧向光散射与细胞内粒子性质有关，由于细胞凋亡或坏死均有细胞内碎片增多，故侧向光散射均高于正常。总之，细胞凋亡出现低于正常的前向散射和较高的侧散射，坏死时则呈较高的前、侧散射光谱。
【材料】
１?试剂：碘化丙啶（PI）染色液，Rnase（1mg/mL），70%冷乙醇，0.01mol/L、Ph7.2PBS。
２?器材：试管，流式细胞仪。
【方法】
（a）标本制备
１?培养细胞
（１）收集悬浮细胞于离心管中。贴壁细胞视情用酶消化后制成单细胞悬液，悬浮细胞合并。
（２）800～1000ｒ/min离心，5min，共2次。
（３）用400目筛网过滤2次。
２?新鲜实体组织
（１）取材组织用PBS漂洗干净后，浸泡在含PBS的平皿或青霉素小瓶中。
（２）用眼科剪尽可能将组织剪碎。
（３）吸去上清液，组织块转入大瓶中加入10～20mL组织消化酶（含200μｇ/mL胶原酶），37℃，30min，并在磁力搅拌器上搅拌。
（４）在不锈钢网上轻轻研磨，使组织和细胞分离。
（５）滤液用200目筛网过滤2次。
（b）荧光染色：上述细胞制备后均应进行荧光染色。
（１）制备的单细胞悬液可用70%乙醇固定，4℃保存。
（２）染色前用PBS进行离心沉淀去除固定液。
（３）加200uL RnaseＡ，37℃水浴30min。
（４）再加入800uLPI染色液混匀，至4℃避光30min。
（５）上机测试。记录激发波长488nm处红色荧光。
【结果】
细胞凋亡时，G1峰左侧出现亚二倍体细胞群的峰型。在光散射图谱上，前向光散射低于正常，侧向光散射高于正常。细胞坏死时，细胞周期中的细胞均出现不同程度的减少，亚二倍体细胞量多少不等。在光散射图谱上，前向光散射和侧向光散射均高于正常。
【注意事项】
悬浮细胞收集时要保证足够数量，否则影响结果准确性。