动物细胞的基本形态观察和细胞计数

【实验目的】

制备不同细胞的临时制片，观察、了解细胞的基本形态；掌握细胞计数方法。

【实验用品】

一、材料和标本 青蛙或蟾蜍一只

二、器材和仪器 显微镜、载片、盖片、吸水纸、手术器材一套、解剖盘一个、血球计数板、小平皿一个、牙签。

三、试剂 1％甲苯胺兰、1％甲基兰、Ringer氏液(两栖类用)。

【实验内容】

一、细胞的基本形态观察

(一)原理

细胞的形态结构与功能相关是很多细胞的共同特点，在分化程度较高的细胞更为明显，这种合理性是生物漫长进化过程所形成的。例如：具有收缩机能的肌细胞伸展为细长形；具有感受刺激和传导冲动机能的神经细胞有长短不一的树枝状突起；游离的血细胞为圆形、椭圆形或圆饼形。

不论细胞的形状如何，细胞的结构一般分为三大部分：细胞膜、细胞质和细胞核。但也有例外。例如：哺乳类红细胞成熟时细胞核消失。

(二)观察方法与结果

1．青蛙或蟾蜍肝脏压片的制备与观察

剪开蟾蜍腹腔，取一小块(约2～3mm3)肝放在平皿内，用Ringer氏液洗净，用镊子轻压将肝中的血挤出。然后放在载片上，制片方法同脊髓压片。染色用甲基兰。显微镜下观察可见肝细胞核染成兰色，肝细胞紧密排列，挤成多角形(参照照片)。

2．人、青蛙或蟾蜍血涂片的制备与观察

取一滴蟾蜍血液，靠近一端滴在载片上．将另一载片的一端呈45°角紧贴在血滴的前缘，均匀用力向前推，使血液在载片上形成均匀的薄层。(图l－1)。晾干。显微镜观察可见蟾蜍红细胞为椭球形，有核。白细胞数目少，为圆形。（显微镜观察人血涂片可见人红细胞为凹圆盘形，无核。自细胞数目少，为圆形）

图1—1血涂片的制备

3．人口腔上皮细胞标本的制备与观察

用牙签刮取口腔上皮细胞均匀地涂在载片上(不可反复涂沫)，滴一滴甲苯胺兰染液，染色5分钟，盖上盖片，吸去多余染液。显微镜下观察可见复盖口腔表面的上皮细胞为扁平椭圆形，中央有椭圆形核，染成兰色。

 

细胞的计数方法

材料和用品

（1）器材：细胞计数板、细口滴管、绸布。

（2）试剂：0.4％台盼蓝。

（3）材料：血细胞悬液。

实验原理

细胞计数一般用血细胞计数板，按白细胞计数方法进行计数。

细胞计数时，先将培养细胞或血细胞稀释成细胞悬液，然后将细胞悬液滴入细胞计数板内，计数计数板上计数室四大格内的细胞数。根据计数室的容积及稀释倍数，即可计算出细胞浓度。

方法与步骤

（一）细胞计数

1. 制备血细胞悬液 取一只乙醚麻醉过的蟾蜍，剪开胸壁、暴露心脏；小心将心脏剪一小口，用吸管吸取心脏血液1ml，用Ringer液按确定的稀释倍数制成细胞悬液。

2. 熟悉血细胞计数板 血细胞计数板呈长方形，有2个计数室。每个计数室分为9个大正方格，每个大格边长为1mm，计数室的底与盖玻片间的距离为0.1mm，及每大格的容积为1mm´1mm´0.1mm=0.1mm3。四角的每个大格被分为16个中格；中央的大格被分为25个中格，中央的每个中格又被分为16个小格（图5-1 ）。

3. 滴片 每人取1付血细胞计数板及1张盖玻片，用布将盖玻片擦净，把盖玻片盖在血细胞计数板槽上，然后用吸管将制备好的蟾蜍血细胞悬液混匀，吸取血细胞悬液，滴1滴于血细胞计数板的盖玻片一侧边缘，使细胞悬液自然流入计数室内。注意血细胞悬液不可滴的过多，如溢出或盖玻片内有气泡必须重做，否则将影响计数结果。该吸管加完样后不能再用。

4.计数 在低倍镜下按图计算计数板的四角大方格（每个大方格又分16个小方格）内的细胞数。计数时，只计数完整的细胞，若聚成一团的细胞则按一个细胞进行计数。数出计数板上计数室四角四大格中的细胞数，如细胞压在格线上时，数上不数下，数左不数右。二次重复计数不应超过±5％（图5-1）。

5.细胞浓度计算 将四大格的细胞总数除以4，得出平均每大格的细胞数，每大格的容积为0.1mm3，乘以10000即为1000mm3（1ml）。因此，不同稀释倍数细胞悬液的细胞浓度可用下式计算：

细胞浓度（细胞数／ml）＝（四大格的细胞数／4）´10000´稀释倍数

作业

计数每毫升细胞悬液中的细胞数（注意单位：个/ ml）

思考题

为什么细胞计数时，细胞悬液逸出凹槽外或有气泡时要重做？

！！！必须注意的问题——生物绘图方法：

绘图是生物实验报告的一种重要形式，其基本要求如下：

1．准备好3H铅笔、橡皮、刀、尺子及绘图纸，将绘图纸放在观察物的有边、纸下不要垫书或纸张。

2．绘图时，特别注意观察物的形状、各部分的位置、比例和毗邻关系。

3．图的位置、大小要适宜，图占报告纸左上方2/3的面积，并考虑注字的位置。

4．观察清楚后，选择典型的细胞或组织，左眼看显微镜，右眼配合右手，先用铅笔在纸上轻轻描出轮廓，使形状正确，然后再用清晰的线条绘出，线条粗细要均匀不要重复。

5．用圆小点表示明暗和立体感，点的大小要均匀，不能涂阴影。

6．图绘好后，要在图的右侧注明各部分结构名称，引线要直而平行，长短适度，各引线不能交叉，各线右端上下对齐，注字要用正楷，不能潦草，要自左向右写。

7．每一个图下面要注明图的名称、放大倍数。

8．绘图纸上所有注字（包括姓名、实验日期、题目等）均用铅笔书写，不能用其他笔写。