一、 实验目的 通过本实验学习PCR反应的基本原理,掌握PCR的基本操作技术以及琼脂糖凝胶电泳技术。 二、 实验原理 PCR用于扩增位于两端已知序列之间的DNA区段,即通过引物延伸而进行的重复双向DNA合成。基本原理及过程如下: PCR循环过程中有三种不同的事件发...
单细胞凝胶电泳分析(single cell gel eletrophoresis,SCGE)是由Ostling等(1984)首创,后经Singh等(1988)进一步完善并逐渐发展起来的一种快速检测单细胞 DNA损伤的实验方法,适用于多种细胞,能够灵敏地检测DNA断裂,在检测诱变剂、射线等对DNA的损伤、...
一、原理 琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶是分离和纯化DNA片段的标准方法。聚丙烯酰胺凝胶电泳适用于分离小分子的核酸;琼脂糖凝胶孔径较大,被应用于大分子核酸的分离和纯化。在一定浓度的琼脂糖凝胶介质中,DNA分子的电泳迁移率与其分子量的常用对数成反比。当用低...
一、原理 琼脂糖凝胶具有分子筛效应。在中性ppH值的电泳缓冲液体系中,DNA分子由于带负电荷,所以在电场作用下由负极向正极泳动。由于DNA分子的大小和构型不同,在相同的时间内迁移至不同的位置。凝胶经溴化乙锭染色后,紫外检测仪下观察,即可看见DNA片段按...
一、实验目的 学习酚、氯仿抽提去除蛋白质的基本方法 了解质粒DNA的抽提方法 学习掌握琼脂糖凝胶电泳的方法 熟练取液枪的使用方法 二、实验原理 在DNA的粗提液或其他的DNA反应体系中,一般都混有蛋白质、寡糖苷酸等杂质。酚和氯仿可以使蛋白质变性,离心后变...
目的 学会从琼脂糖凝胶中回收DNA片段的基本技术。 2.原理 限制性内切酶切割后的DNA片断经过电泳后,按分子量大小被分开,排列在琼脂糖凝胶中,可以将特定的某条DNA带所在的凝胶切下来,加热或用特殊的试剂熔解凝胶,使DNA溶回到溶液中,再经过乙醇沉淀或过柱...
实验目的 学习水平式琼脂糖凝胶电泳检测DNA的纯度、构型、含量和分子量大...
原理: 琼脂糖是从海藻中提取出来的一种线状高聚物,可作为电泳支持物,适用于分离大小范围在0.2-50kb的DNA片段。DNA分子的迁移率与分子量的对数值成反比关系。观察其迁移距离,与标准DNA片段进行对照,就可获知该样品分子量大...
(10)倒去预杂交液,加入含探针的杂交液封口,42℃ 6h或过夜。 (11)取出转移膜,按以下条件洗膜 1SSC,0.1%SDS室温215分钟 0.25SSC,0.1%SDS,42℃ 215分钟,气中干燥。 (12)将杂交后的膜曝光于X光片,暗盒中放射自显影2~7天,-70℃。 (13)X片显影、定影,然...
一、DNA Southern Blot及杂交 本技术可用于基因组DNA特定序列定位,尤其可分析某些基因的限制性内切酶长度多态性,对遗传性疾病的早期基因诊断、产前诊断或基因变异等方面的研究有应用价值,其过程包括:样品DNA内切酶水解、水解片断的琼脂糖凝胶电泳分离、分...