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  • RACE的原理、应用和优缺点2017-10-16 09:35:15

    一、RACE 的简介 目前,全长基因的获得是生物工程及分子生物学研究的一个重点。尽管已经有多种方法可以获得基因的全长序列,但在很多生物研究中,由于所研究的目的基因丰度较低,从而使得由低丰度mRNA通过转录获得全长cDNA很困难。近年来发展成熟的cDNA末端快...

  • SMARTTM 5'-RACE PCR的原理2017-10-16 09:34:28

    SMARTTM 5-RACE的原理是先是利用mRNA的3末端的poly(A)尾巴作为一个引物结合位点,以Oligo(dT)30MN作为锁定引物在反转录酶MMLV作用下,反转录合成标准第一链cDNA。利用该反转录酶具有的末端转移酶活性,在反转录达到第一链的5末端时自动加上3一5 个(dC)残基,...

  • 基因的PCR扩曾反应(聚合酶链式反应)2017-10-16 09:33:38

    实验原理: 聚合酶链式反应(PCR,polymerase chain reaction)实质是体内DNA复制的体外模拟。当双链DNA变性为单链以后,DNA聚合酶以单链DNA为模版,并利用反应混合物中的四种dNTP,以与模板互补的寡聚核苷酸链为引物,合成新的DNA互补链。新合成的DNA链的起...

  • RAPD分析的原理及操作技术2017-10-16 09:32:47

    1 目的 分子标记是一类建立在分子水平上的遗传标记,它同样具有遗传标记的两个特点,即可遗传性和可识别性。广义的分子标记包括同工酶和DNA分子标记两类,狭义的分子标记则仅指后者。DNA分子标记通常是一些小分子量的DNA片段(几十到2000bp左右),它们大量存...

  • mRNA差别显示技术[DDRT-PCR]2017-10-16 09:31:58

    随着PCR技术的发展,人们在此基础上建立起了一系列基于基因分离的新技术新方法。如mRNA差别显示技术(DDRT-PCR)、以及进一步改进的代表性差示分析(RAD),抑制性扣除杂交(SSH)和交互扣除RNA差别显示技术(RSDD)。 差别显示PCR是根据绝大多数真核细胞m...

  • 反向PCR(reverse PCR)原理、程序和局限2017-10-16 09:31:06

    反向PCR(reverse PCR)是用反向的互补引物来扩增两引物以外的未知序列的片段,而常规PCR扩增的是已知序列的两引物之间DNA片段.实验时选择已知序列内部没有切点的限制性内切酶对该段DNA进行酶切,然后用连接酶使带有粘性末端的靶序列环化连接,再用一对反向的引...

  • 原位PCR技术基本原理、类型、步骤和应用-22017-10-16 09:30:16

    标本的制备 原位PCR技术可应用于细胞悬液、细胞涂片、冰冻切片以及石蜡切片。相比较而言,以悬浮的完整细胞做原位PCR效果最好,石蜡切片效果最差。随着技术方面的一些问题被解决,近年也有从石蜡切片中得到满意的PCR效率的报道。效果不好的原因是多方面的,如...

  • 原位PCR技术基本原理、类型、步骤和应用-12017-10-16 09:29:27

    在科学研究中,每一项新技术的创立都会带来一系列新的研究成果问世,从而推动着各学科的发展。纵观形态研究领域,50年代电子显微镜引入形态学观察领域,带来了从细胞水平到亚细胞水平的深入研究;60-70年代,免疫组织化学与免疫细胞化学技术的广泛应用,又将...

  • 荧光定量PCR技术特点、原理及其应用-22017-10-16 09:28:36

    3 应用 由于FQ-PCR具有高灵敏性,高特异性和高精确性的特点,目前,该项技术已被应用于病原体测定、肿瘤基因检测、免疫分析、基因表达、突变及其多态性的研究等多个领域。 3.1 病原体测定 由于PCR技术的问世,使得病原体检测能够快速而方便的进行。但由于其高...

  • 荧光定量PCR技术特点、原理及其应用-12017-10-16 09:27:46

    荧光定量PCR(也称TaqMan PCR,以下简称FQ-PCR)是美国PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出来的一种新的核酸定量技术,该技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针来实现其定量功能的,与变通PCR相比,FQ- PCR具有许多优点。本文拟就该技术的特点、原理和方法以...

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