作者:中华医学网
发布时间:2017-10-16 09:34浏览:
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我们在实验中发现,要做好RACE反应实验不容易,实际操作中仍存在不少困难。因此,对RACE反应条件进行反复摸索是实验必须要做地。这是因为:第一,在5‘-RACE包含了有3个连续的酶反应步骤(反转录、同聚物加尾和PC R扩增),每一步都可能导致失败;第二,扩增。DNA末端的特异性完全依赖锚定引物及扩增DNA模板样品不均一性,因而特异性一般很低,常呈现不清晰的成片条带或截短的产物背景。因此,使用RACE技术扩增得到的特异末端片段,所获得的重组克隆最好能够全部测序,以排除RACE实验结果中扩增产物假阳性和假阴性,最终有可能获得新基因的全序列。
我们相信,随着RACE的不断改进和完善,优化条件下PCR扩增效率和忠实性的提高及PCR产物克隆技术的迅速发展,RACE必将在基因克隆及基因表达研究中发挥越来越大的作用