作者:中华医学网
发布时间:2017-10-16 08:22浏览:
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1、组织块培养
在无菌条件下在超净台中切开眼球,经后部取出晶状体,仔细截取晶状体前囊,将前囊皮剪成1mmx37℃的CO2培养箱内孵育,12-24h,当囊膜片及散落的晶状体上皮细胞贴壁后,加入含有10%胎牛血清的DMEM培养基,随后根据细胞的生长速度每3-4天换液一次。原代培养的细胞在培养瓶底长满融合后,用0.02%EDTA+0.25%胰酶消化后传代,以1:2或1:3的分种率传代。培养基为含200x103U/L、链霉素250mg/L及含20%胎牛血清的DMEM培养基。
2、晶状体细胞的生长特点
原代培养的晶状体上皮在接种后2-3天即可见植片边缘有新生的晶状体上皮细胞。这些新生细胞呈六边形或多角形镶嵌排列,围绕植片形成贴壁生长的单层细胞。细胞在接种2-3周后生长满融合即可传代。传代的细胞一般24h贴壁,1-2周长满融合成紧密排列的单层上皮细胞。
在细胞增殖的早期,植块周围的晶状体上皮细胞呈拉长的梭形,随着细胞数目增多,密度增加,梭形细胞变为多边形,而在增殖带的外围。细胞以及较大,形态不规则且排列比较稀疏。中央区晶状体前囊膜、赤道前区晶状体前囊膜、赤道区晶状体前囊膜3个上皮细胞在培养后其形态特征无明显差异。
3、新生小牛、兔晶状体上皮细胞特点
在24-48h有上皮细胞自囊膜片生长移出。培养的小牛、兔晶状体上皮细胞约需6-10天发生融合长满瓶底。经消化后按1:2传代的小牛、兔晶状体上皮细胞生长迅速,约3-4天细胞可达融合,融合后的细胞呈多角形、椭圆形,大小基本一致。传代第3代,小牛兔晶状体上皮细胞虽生长迅速,但部分细胞形态已呈现出梭形的成纤维细胞的外观,至第5代大部分细胞形态都发生了如此改变,胞内可见网状结构,第6-7代时,细胞生长缓慢,胞内网状结构增多,出现空泡样改变。第8代时,生长特别缓慢,胞内网状结构及空泡样改变明显增多。
4、胎儿、成人晶状体上皮细胞生长特点
胎儿在24-48h就有上皮细胞自囊膜片生长移出,而成人在40-72h才可见有细胞子囊膜片生长移出,外观呈芽孢状,近囊膜片处细胞生长密集,呈多角形。远离囊膜片处细胞生长稀疏,胞体延伸。培养的胎儿晶状体上皮细胞约需9-12天发生融合长满瓶底,成人约需11-14天;传代的胎儿晶状体上皮细胞生长稍有所缓慢,约6-8天细胞发生融合,不同年龄的人晶状体上皮细胞生长更加缓慢,但形态一致,约需7-14天细胞才达到融合。胎儿和不同年龄人晶状体上皮细胞传代至第4代才可见细胞梭形改变,在第6-7代胞内也可见有网状结构及空泡样改变,第8代时,细胞发生衰老。
5、胎儿晶状体上皮细胞原代长期培养观察
原代胎儿晶状体上皮细胞约经10天培养后发生融合,不给于消化传代,每隔2-3天换液一次继续培养,细胞生长逐渐密集,呈现复层样生长,培养至6周时可见有细胞呈同心圆环绕的小球状结构的形成,小球体内无细胞成分,Gimsa染色呈粉红外观。
6、晶状体上皮细胞生长曲线
根据对小牛、兔、胎儿第2代不同培养时间的细胞计数,绘制出各自的生长曲线,并求出各自的细胞倍增时间,分别为24h、24.5h、26h;第2代3种不同年龄人晶状体上皮细胞各自的细胞倍增时间分别为29h、32h、33.5h。人晶状体上皮细胞供体的年龄与细胞倍增时间两者之间呈负相关,其相关系数r=-0.996