Problem：信号弱（1-30秒的曝光后检测不到信号） |
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Cause：一抗孵育不足 |
Solution：适当延长孵育时间（4℃孵育过夜） |
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Cause：转膜不完全 |
Solution：转膜时采用更高的电压和更长的时间。也可采用预染的蛋白Marker 监控转膜的过程 |
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Cause：阻断膜超时 |
Solution：阻断膜的时间不能超过1小时 |
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Cause：蛋白的表达水平低于检测底限 |
Solution：在每孔中加入更多的蛋白；先采用免疫沉淀法富集蛋白；换用表达高的样本或细胞；检测前适当刺激蛋白的表达 |
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Cause：二抗与一抗的结合率太低 |
Solution：提高二抗的浓度或换用与一抗匹配的二抗 |
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Cause：配制试剂时发生交叉污染 |
Solution：重新配制各种试剂 |
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CST 免疫组化 疑难解答 |
Problem：无着色
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Cause：组织切片的质量不好或固定不足 |
Solution：更换好的组织切片 |
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Cause：底物反应时间太短 |
Solution：延长底物反应时间，直至出现着色 |
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Cause：不合适的一抗或二抗 |
Solution：更换一抗或二抗 |
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Cause：没有执行抗原修复 |
Solution：执行抗原修复 |
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Cause：试剂的配制不正确 |
Solution：重新配制试剂 |
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Cause：蛋白表达太低 |
Solution：加入对照试验 |
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Problem：着色太浅
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应时间太短 |
Solution：延Cause：底物反长底物反应时间 |
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Cause：一抗的浓度太低或孵育不足 |
Solution：提高一抗的浓度（1:50;1:100） |
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Cause：蛋白表达太低 |
Solution：加入对照试验 |
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Problem：着色太深
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Cause：底物反应时间太长 |
Solution：减少底物反应时间 |
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Cause：一抗或二抗的浓度太高 |
Solution：降低一抗或二抗的浓度2-3倍 |
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Cause：切片的质量不好 |
Solution：选用质量好的组织切片 |
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Cause：组织切片没有进行阻断 |
Solution：用含5％ 血清的阻断液阻断1小时 |
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Cause：冲洗不完全 |
Solution：每次冲洗时间不低于5分钟 |
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Cause：二抗与样本发生交叉反应 |
Solution：选用合适的二抗 |
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Problem：不正确的染色
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Cause：底物反应时间太长 |
Solution：减少底物反应时间 |
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Cause：一抗或二抗的浓度太高 |
Solution：降低一抗或二抗的浓度2-3倍 |
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Cause：阻断不足 |
Solution：延长阻断时间或提高 血清浓度 |
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Cause：切片的质量不好 |
Solution：选用质量好的组织切片 |
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