PCR产物的检测PCR-ELISA法

在一个引物的5’端标记上生物素以便使其能与包被板上的亲合素结合而固定PCR产物，而在另一引物的5’端标记FITC，用HRP标记的抗FITC抗体与之结合显色，即可进行常规ELISA检测。如设立标准对照，此技术还可用于定量分析。

【试剂与配置】
包被液：4.3mmol/L Na2HPO4, 1.4mmol/L K2HPO4, 0.05% (w/v) Tween20, 40mmol/L NaCl, 2.7mmol/LKCl (pH7.2)
链霉亲和素（13U/mg, Sigma）：用包被液配置为1μg/ml；
HRP标记的抗FITC抗体：用包被液稀释至工作浓度
显色液：1mg/ml的TMB（溶于DMSO），用50mmol/L乙酸钠-柠檬酸（pH4.9）稀释10倍；
终止液：2mol/L H2SO4
30%过氧化氢

【操作方法】
（1）在酶标板的每孔中加100μl链霉亲和素，室温包被过夜；
（2）室温下，用包被液洗2次；
（3）1μl PCR产物用50μl包被液稀释，加入孔中，室温放置30min；
（4）包被液洗3～6次，每孔再加入50μl HRP-抗FITC抗体，室温作用30min；
（5）包被液洗3～6次，加入30%过氧化氢3μl，显色液80μl，室温放置2～5min，观察颜色变化；
（6）加入终止液终止反应，酶标仪上测OD450nm值。