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血清总胆固醇的测定

作者：中华医学网发布时间：2017-10-14 07:50浏览：次

实验原理
血清胆固醇(chol)测定是动脉粥样硬化性疾病防治、临床诊断和营养研究的重要指标。正常人血清胆固醇含量范围 100 ~ 250mg/mL。胆固醇是环戊烷多氢菲的衍生物，它不仅参与血浆蛋白的组成，而且也是细胞的必要结构成分，还可以转化成胆汁酸盐、肾上腺皮质激素和维生素D等。胆固醇在体内以游离胆固醇及胆固醇酯两种形式存在，统称总胆固醇。总胆固醇的测定有化学比色法和酶学方法两类。本实验采用前一方法。胆固醇及其酯在硫酸作用下与邻苯二甲醛产生紫红色物质，此物质在550nm波长处有最大吸收。因此，可用比色法作总胆固醇的定量测定。胆固醇含量在 400mg/100mL以内时，与光吸收值呈良好线性关系。本法不必离心，颜色产物也比较稳定。
试剂和器材
一、试剂
邻苯二甲醛试剂：称取邻苯二甲醛50mg，以无水乙醇溶至50mL冷藏，有效期为一个半月。
混合酸：冰乙酸100mL与浓硫酸100mL混合。
标准胆固醇贮存液（1mg/mL）：准确称取胆固醇100mg，溶于冰乙酸中，定溶至100mL。
标准胆固醇工作液（0.1mg/mL）：将上述贮存液以冰乙酸稀释10倍，即取10mL用冰
乙酸稀释至100mL。
二、测试样品
0.1mL人血清以冰乙酸稀释至4.00mL。
三、器材
试管1.5×15cm（×12）；移液管0.5mL（×5），10mL（×1），0.1mL（×1）；分光光度计。

操作方法

一、制作标准曲线

取9支试管编号后，按下表顺序加入试剂：

管号	0	1	2	3	4	5	6	7	8
标准胆固醇工作液(mL)	0	0.05	0.10	0.15	0.20	0.25	0.30	0.35	0.40
冰乙酸(mL)	0.40	0.35	0.30	0.25	0.20	0.15	0.10	0.05	0
邻苯二甲醛试剂(mL)	0.20	0.20	0.20	0.20	0.20	0.20	0.20	0.20	0.20
混合酸(mL)	4.00	4.00	4.00	4.00	4.00	4.00	4.00	4.00	4.00
相当于未知血清中总胆固醇量(mg%)	0	50	100	150	200	250	300	350	400
A550

加毕，温和混匀，20～37℃下静置10分钟，在540nm波长处测定光吸收值。以总胆固醇量（mg%）为横坐标，光吸收值为纵坐标做出标准曲线。

二、样品测定

取3支试管编号后，分别加入试剂，与标准曲线同时作比色测定：

管号	对照	样品 ①	样品 ②
稀释的未知血清样品(mL)	0	0.40	0.40
邻苯二甲醛试剂(mL)	0.20	0.20	0.20
冰乙酸(mL)	0.40	0	0
混合酸(mL)	4.00	4.00	4.00
A550