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糖酵解中间产物的鉴定

作者:中华医学网发布时间:2017-10-14 07:33浏览:

原理
利用碘乙酸对糖酵解过程中3-磷酸甘油醛脱氢酶的抑制作用,使3-磷激甘油醛不再向前变化而积累。硫酸肼作为稳定剂,用来保护3-磷酸甘油醛使不自发分解。然后用2,4-二硝基苯肼与3-磷酸甘油醛在碱怀条件下形成2,4-二硝基苯肼-丙糖的棕色复合物,其棕色程度与3-磷酸甘油醛含量成正比。
操作方法
1、取小烧杯3只,分别加入新鲜酵母0.3克,并按下表分别加入各试剂 ,混匀。

2、将各杯混合物分别倒入编号相同的发酵管内,放入37℃保温1.5小时,观察发酵管产生气泡的量有何不同。

 

杯号

5%葡萄糖(ml)

10%三氯醋酸

ml)

碘乙酸

ml)

硫酸肼

ml)

发酵时

气泡多少

1

10

2

1

1

 

2

10

-

1

1

 

3

10

-

-

-

 

3、把发酵管中发酵液倾倒入同号小烧杯中并在2和3号杯中按下表补加各试剂,摇匀放10分钟后和第一只烧杯中内容物一起分别过滤,取滤液进行测定。

 

杯号

10%三氯醋酸(ml)

碘乙酸(ml)

硫酸肼(ml)

2

2

-

-

3

2

1

1

4、取三个试管,分别加入上述滤液0.5毫升,并按下表加入试剂和处理。

 

管号

滤液

ml)

0.75N NaOH

室温放置10分钟

2,4-二硝基苯肼

38℃水浴保温10分钟

0.75N

NaOH

观察结果

1

0.5

0.5

0.5

3.5

 

2

0.5

0.5

0.5

3.5

 

3

0.5

0.5

0.5

3.5

 

试剂和器材

一、试剂

1)2,4-二硝基苯肼:0.1克2,4-二硝基苯肼溶于100毫升2N 盐酸溶液中,贮于棕色瓶备用。

2)0.56M硫酸肼溶液:称取7.28克硫酸肼溶于50毫升水中,这时不易全部溶解,当加入NaOH使PH达7.4时则完全溶解。此液也可用水合肼溶液配制,可按其分子浓度稀释至0.56M,此时溶液呈碱性,可用浓硫酸调PH 达7.4即可。

3)5%葡萄糖溶液 (4)10%三氯乙酸

5)0.75N NaOH溶液 (6)0.002M碘乙酸

7)酵母

二、器材

1) 试管(1.5×15cm) (2)吸量管(1、2、10ml)

(3)恒温水浴 (4)烧杯(50ml)